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生技1001第三组实验报告 第三组（4人） 组员（按学号）宏 万雪原 经俊 尚勇 任务分工：陈宏：协调实验的进程，记录分析数据，撰写实验报告后半部分！ 万雪原：协助实验的进程，少部分实验操作.撰写实验报告后前半部 分 李经俊：配置NaOH溶液，实验主负责，数据整理分析。 张尚勇： 协助本组成员完成实验，打扫卫生，清理现场！ 实验一：热带假丝酵母产SCP发酵过程的分析 一、实验目的 单细胞蛋白（SCP)含有丰富的氨基酸、还原糖等物质。本实验对四种培养基分别培养的热带假丝酵母产SCP发酵过程的分析，掌握发酵过程有关参数的测定和分析方法。 二、材料和方法 菌种：热带假丝酵母，发酵摇床等各种仪器。 四种培养基：碳源分别是葡萄糖（P)、麦芽糖(M）、蔗糖（Z）、水（不含任何糖），蛋白胨、MgSO4、KH2PO4、pH自然。 分析测定项目：发酵液菌体干重、还原糖量、NH2-N。 1：将已经接种好的培养液分别取出1ml于50ml烧杯中并且稀释至原先的20倍待用。 2测定菌浓（OD700）： 制作空白对照组：以蒸馏水作空白调零在波长700nm分别测定四种不同碳源的菌悬液的OD值记录数据。 （2）依据下列表格，通过换算发酵液菌体干重。（表1） 表1 发酵液菌体干重与OD OD（稀释100倍） 0 0.138 0.129 0.235 0.205 0.276 0.254 0.345 0.334 10ml发酵液菌体干重(g) 0 0.1106 0.1082 0.1639 0.1546 0.1981 0.1934 0.2244 0.2133 线性方程：y=0.6331x+0.017 （y：10ml发酵液菌体干重；x：OD700值；相关系数r=0.9858） 配制1.0g/l的标准葡萄糖溶液、DNS（3,5-二硝基水杨酸） 分别吸1.0g/l的标准葡萄糖溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8ml于试管中，再补加蒸馏水至2ml,加DNS试剂2.0ml混匀，于沸水浴中准确反应5min，取出立即冷水浴中冷却至室温，然后定容至25ml,以空白管调零在波长540nm处比色，以OD值为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标制作标准曲线。 4.发酵液中的糖浓度： 分别将四种培养基P葡萄糖、M麦芽糖、Z蔗糖、水（没加任何糖）稀释后的菌悬液，取1ml于试管中，按照葡萄糖标准曲线制作的程序进行葡萄糖含量的测定，根据发酵液稀释倍数和葡萄糖标准曲线，计算出发酵液中还原糖含量。 5.发酵液NH2-N的测定方法： （1）配制0.03%硫酸液、18%中性甲醛、0.2mol/l氢氧化钠标准液 （2）取稀释20倍的菌悬液10ml，于20ml烧杯中，加入50ml 的0.03%硫酸液，摇匀，放置10min, 用pH标准缓冲液校正后的pH电极插入到烧杯中，（本组用pH试纸，比色卡），搅拌摇匀，用0.2mol/l氢氧化钠标准液中和至pH=6，加入18%中性甲醛5ml,摇匀，放置10min, 再用0.2mol/l氢氧化钠标准液滴定至pH=9，记录第二次用碱式滴定管滴定时消耗氢氧化钠标准液的体积Vml. (3) 计算：发酵液氨氮含量N%（mg/100ml)=600V。（经由公式推导） 四、实验结果分析 （1）实验数据记录表格 1. 不同葡萄糖浓度的OD值（表2） 表2 葡萄糖浓度与OD 葡萄糖浓度mg/ml 0 0.08 0.16 0.24 0.36 光吸度值 0 0.099 0.133 0.168 0.278 液中的还原糖浓度、氨基氮含量测定 （表） P葡萄糖 M麦芽糖 Z蔗糖 水 菌浓OD700 还原糖0D540 NaOH体积 发酵液菌体干重 线性方程：，y表示10ml发酵液菌体干重，x表示OD700值。将四个OD700值代入，考虑到线性方程OD700是在稀释100倍测得的，而本实验在稀释20倍测得，以及发酵液干重（g/L) , ，所以发酵液干重（g/L) =。 由这标准曲线， y表示还原糖浓度，x表示OD540值，由稀释度为20，所以还原糖浓度=y×20。 ③氨基氮含量计算：其中C=0.2(mol/l),M=14.01(g/mol)。推导发酵液氨氮含量N%（mg/100ml)=600V。 由①②③可知参数分析结果为：（表） 表5 四种培养基各参数测定数据处理总表 P葡萄糖 M麦芽糖 Z蔗糖 水 发酵液干重（g/L) 还原糖(mg/ml) 氨