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LightCycler? 480 中文操作说明 罗氏医学仪器公司 / 应用科学部门 February 2008 目录 一. 启动机器与软件 3 二. 软件设定 --- 开启新实验 5 三. 样品编辑 9 四. 结果分析 12 五. 报告 18 六. 数据转移至其它计算机(数据输出与输入) 19 七. 使用者管理 19  一． 启动机器与软件 启动机器 机器主开关位于机器右后方。 机器正面两个警示灯代表机器状态。待警示灯 (右) 由闪烁橘色灯转变成稳定橘色灯，警示灯 (左) 由橘色转变成绿色 (约三分半钟)，表示机器已经启动完成。 左警示灯 右警示灯 机器状态 橘 *闪烁* 橘 *闪烁* 正在初始化 绿 橘 机器启动完成 96/384孔盘还未放入 绿 橘 *闪烁* 96/384 孔盘正在放入中 绿 绿 机器启动完成 96/384 孔盘已经放入 绿 *闪烁* 绿 *闪烁* 实验进行中 按压机器正面上唯一的按钮，放入已经封膜完成之 96 或 384 孔盘。放置完成后，左右两警示灯都呈现绿色。 启动软件 开启计算机，并以正确的使用者名称与密码登入 Windows。 User name: OPERATOR Password: LC480 开启 LightCycler 480 软件，并输入正确的使用者与密码。  二．软件设定-- 开启新实验 设定新实验 软件开启后，会进入主画面。点选 “New Experiment”。 出现实验设定窗口。任何时候需要回主画面的话，点选画面右边的按钮。 设定实验 若要套用设定好的实验步骤 (Template)，请跳至 6.。 在实验设定画面上方，先选择适当的 Detection Format。选项包含: 另外可再点选 “Customize” 勾选所需的滤片组合。 输入反应体积: 96 well plate 范围为 10-100 ul，而 384 well plate 范围为 5-20 ul。 设定实验步骤 (Program) 设定 program，包含有 Pre-incubation, Amplification (PCR), Melting curve (optional) 与 Cooling。利用 『+』与 『－』增加或删除步骤。 设定循环数目 (Cycle) 与分析模式。通常 Amplification (PCR) program设定成 『Quantification』，而 Melting Curve program 设定成『Melting Curve』。 设定详细温度变化 (依照不同实验方法与设计而有所不同) 点选各个 program 即可设定详细温度变化步骤，请根据产品说明书来设定，利用 『+』与 『－』增加或删除步骤。需要设定的参数包含 Target (℃) 目标温度，Acquisition Mode (荧光侦测模式)，Hold (hh:mm:ss) 停留时间。Ramp Rate (℃/s) 为升降温速度，范围如下： Ramp Rate (℃/s) Heating up Cooling down 96-well Block 1.0 – 4.4 ℃/s 1.0 – 2.2 ℃/s 384-well Block 1.0 – 4.8 ℃/s 1.0 – 2.5 ℃/s 若设定温度低于 50℃，请把 Ramp Rate 调整成 1.5℃/s (96 well) 或 2.0℃/s (384 well)。 将实验步骤储存成 『Template』以便下次进行套用。点选左下角 “Save As Template” 即可把此步骤储存起来。 若要进行套用时，请直接点选窗口左下角 “Apply Template” ，选择欲套用之实验步骤即可。 设定完成后点选 “Start Run” 开始进行实验。 跳出档案储存窗口，请输入欲储存之文件名称。 实验进行中会进入另一个 Data窗口，窗口下方按键功能如下： End Program : 结束此 Program, 进入下一个 Program。 + 10 Cycles : 实时增加循环数目。 Abort Run: 马上结束此实验，请注意，若按此键，则此次实验的结果将不储存。  三．样品编辑 将样品分群 点选窗口左边的 “Subset Editor”。 点选 “New” 新增新的群组，并将其命名。 利用鼠标选取此群组之样品位置，点选窗口右下角 “Apply” ，此时被选取的样品位置会呈现实心的蓝色，如下图。