BRMS1、整合素β1及p—AKT在卵巢癌组织中表达及临床意义.docVIP

BRMS1、整合素β1及p—AKT在卵巢癌组织中表达及临床意义 　　[摘要] 目的 研究乳腺癌转移抑制因子1（BRMS1）、整合素β1、p-AKT在卵巢癌中的表达及其与临床病理特征的关系。 方法 应用免疫组织化学法检测卵巢癌、良性肿瘤及其卵巢组织中BRMS1、整合素β1、p-AKT的表达。结果BRMS1在卵巢癌中阳性表达率降低（P 　　[关键词] 乳腺癌转移抑制因子1；整合素β1；p-AKT；卵巢癌 　　[中图分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）08（b）-0009-03 　　卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤，70%的患者就诊时已经出现转移[1-2]。乳腺癌转移抑制基因1（breast cancer metastasis suppressor 1，BRMS1）是最近发现的一种新的转移抑制基因。其在卵巢癌组织中低表达。笔者前期体外试验证明，其具有抑制卵巢癌细胞侵袭、转移及黏附的功能，但缺乏体内及临床标本验证[3]。整合素不仅是黏附分子，也是一种信号转导分子，其能介导细胞内外双向信息传递，从而发挥其调节细胞生物学行为的功能，这种作用主要通过β亚基完成。整合素β1在卵巢癌组织及细胞株中高表达[4]，与患者的预后、组织分化呈负相关[5]。整合素β1/AKT信号通路在卵巢癌侵袭转移过程中起到重要作用，而BRMS1与整合素β1/AKT信号通路在卵巢癌中相关性的研究目前极少见到报道。研究BRMS1、整合素β1及p-AKT在卵巢癌组织中的表达，可以为了解卵巢癌的发生发展及BRMS1抑制肿瘤侵袭转移的机制提供一个新的切入点。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　收集郑州大学第一附属医院医院妇科2008年1月～2012年12月，资料完整的46例卵巢癌石蜡标本，患者年龄24～76岁，中位年龄48岁，绝经前18例，绝经后28例。切片经常规HE染色，至少2位病理学专家独立诊断。按照FIGO分期标准分类：Ⅳ期4例，Ⅲ期25例，Ⅱ期9例，Ⅰ期8例；组织学类型：浆液性囊腺癌28例，低分化腺癌2例，子宫内膜样癌6例，黏液性囊腺癌7例，透明细胞癌3例；病理分级：G1级9例，G2级19例，G3级18例；腹水：有腹水35例，无腹水11例。收集同期因其他病因而切除的卵巢组织，其中，正常卵巢组织16例，患者年龄45～60岁，中位年龄50岁；卵巢良性肿瘤11例，其中，浆液性囊腺瘤8例，黏液性囊腺瘤3例；患者年龄28～75岁，中位年龄49岁。所有患者术前均未接受放疗、化疗、激素及生物治疗。 　　1.2 试剂 　　兔抗人整合素β1多克隆抗体购自上海亿欣生物科技有限公司；兔抗人BRMS1多克隆抗体购自北京博奥森生物有限公司；兔抗人p-AKT（Ser473）抗体购自美国Santa Cruz公司。SP（链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶）免疫组化试剂盒、DAB（3，3-二氨基联苯胺）显色试剂购自北京中山生物技术有限公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 免疫组化染色 石蜡标本连续切成4 μm切片，以SP法进行免疫组织化学染色。BRMS1及整合素β1一抗工作浓度为1∶300，p-AKT工作浓度为1∶500。以磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。二抗工作浓度按照SP试剂盒说明进行。 　　1.3.2 结果判定 镜下观察，目的蛋白在细胞核和（或）细胞浆着色，呈浅黄、棕黄、黄褐色等不同程度。每张切片镜下（×400）分析阳性细胞所占比例和染色强度，随机观察5个视野。500个细胞中计数阳性细胞比例。细胞计数评分标准：阳性细胞70%为3分；染色强度评分标准：不着色者为0分，浅黄色者为1分，棕黄色者为2分，黄褐色者为3分。将两项评分相加，0～1分者阴性（-），2分者弱阳性（+），3～4分者中度阳性（++），5～6分者强阳性（+++）。综合评分结果，（-）为阴性，（+～+++）为阳性。 　　1.3.3 统计学方法 采用χ2检验和Spearman相关分析，以P0.05）；p-AKT的表达与卵巢癌的分化程度及临床分期显著相关（P 　　2.3 BRMS1、整合素β1、p-AKT蛋白在卵巢癌组织中表达间的关系 　　经Spearman相关分析，卵巢癌组织中BRMS1与整合素β1及p-AKT表达呈明显负相关（r=-0.59，r=-0.50，P 　　[9] Seraj MJ，Samant RS，Verderame MF，et al.Functional evidence for a novel human breast carcinoma metastasis suppressor，BRMS1，encoded at chromosome 11q13[J].Cancer Res，2000，60（11）：2764-27