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HPLC测定克咳片中生物碱成分含量 　　摘要：目的 建立高效液相色谱法同时测定克咳片中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱含量的方法。方法 色谱柱：phenomenex Synergi Polar-RP柱（4.6 mm×250 mm，4 ?m）；流动相：甲醇∶0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）=1.5∶98.5；检测波长：210 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃。结果 盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的线性范围分别为6.51×10-3～0.651 ?g（r=0.999 9）、6.27×10-3～0.627 ?g（r=1），平均加样回收率（n=6）分别为102.26%、103.71%，RSD分别为0.34%、0.22%。结论 该方法简便、准确，重复性好，专属性高，结果可靠，可有效控制克咳片中生物碱成分的质量。 　　关键词：克咳片；麻黄；盐酸麻黄碱；盐酸伪麻黄碱；含量测定；高效液相色谱法 　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.11.020 　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）11-0053-03 　　通讯作者：鲁寅生，E-mail：lu2201@ 　　克咳片由麻黄、罂粟壳、甘草、苦杏仁、桔梗、莱菔子、石膏共7味药组成，有止咳、定喘、祛痰之功效，用于治疗咳嗽、 　　喘急气短等病症。目前国内有3家制药企业生产该品种，且未见《中华人民共和国药典》收录克咳片的质量标准。麻黄为本品君药，其药理活性较强的成分为生物碱类成分盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱[1-3]，含量测定方法主要有薄层扫描法、高效液相色谱法（HPLC）、毛细管电泳法、气相色谱法及液质联用、气质联用、微乳液电动色谱、核磁共振等[4-10]，其中以HPLC最为常见。本试验采用HPLC测定不同厂家不同批次克咳片中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的含量，为更准确、有效控制克咳片的质量提供依据。 　　1 仪器与试药 　　ThermoFisher Dionex U3000超高液相色谱仪，Chromeleon 6.80中文版；JL-720DT超声波清洗器，上海吉理超声仪器有限公司；TG16-WS台式高速离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司；C300真空泵，北京桑翌科技发展有限公司；HSE-12固相萃取装置，天津市恒奥科技发展有限公司；Cleanert PCX-SPE（混合型阳离子交换固相萃取小柱）60 mg/3 mL，Agela Technologies。 　　盐酸麻黄碱对照品（171241-201007）和盐酸伪麻黄碱对照品（171237-201208），中国药品生物制品检定所。克咳???，由中山市恒生药业有限公司（批2011050220110504）和江西民济药业有限公司（批号110617、110618）提供；缺麻黄的阴性样品由中山市恒生药业有限公司制备并提供。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱：phenomenex Synergi Polar-RP柱（4.6 mm×250 mm， 4 ?m）；流动相：甲醇∶0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）=1.5∶98.5；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：210 nm；进样量：5 ?L。 　　2.2 溶液的制备 　　2.2.1 对照品溶液的制备 分别取盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱对照品适量，精密称定，加新鲜配制的5%氨甲醇溶液溶解并制成浓度分别为13.02、12.54 ?g/mL的混合对照品溶液。 　　2.2.2 供试品溶液的制备 取本品，研细，取约0.4 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入1.5%磷酸溶液50 mL，密塞，称定质量，超声（功率720 W，频率40 kHz）45 min，放冷，再次称定质量，加1.5%磷酸溶液补足重量，摇匀，6000 r/min离心5 min，取续滤液2 mL，通过已活化的PCX-SPE（水约10 mL→甲醇约10 mL→0.1 mol/L盐酸约20 mL），用甲醇5 mL洗脱，弃去洗脱液，再用新鲜配制的5%氨甲醇溶液5 mL洗脱，收集洗脱液，即得。 　　2.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺麻黄的阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。 　　2.3 系统适用性试验 　　两组分的色谱峰与邻峰的分离度均大于1.5，理论塔板数按盐酸麻黄碱计算不低于3000，说明两组分在此色谱条件下均得到较好的分离。 　　2.4 专属性试验 　　精密吸取上述3种溶液各5 ?L，按“2.1”项下色谱条件测定，见图1。结果表明，阴性样品溶液色谱图中在盐酸麻