代谢型谷氨酸受体5 mRNA与脑梗死相关性研究.docVIP

代谢型谷氨酸受体5 mRNA与脑梗死相关性研究 　　【摘要】 目的：观察急性脑缺血大鼠脑组织中mGluR5 mRNA在不同时段的表达变化的规律，探讨mGluR5 mRNA与脑梗死的相关性。方法：75只雄性Wistar大鼠按照随机数字表法分为正常对照组、手术组1、3、6、12、24 h及3 d、14 d组及其相对应的假手术对照组，采用大鼠MCAO模型，利用原位杂交技术，检测各组mGluR5 mRNA的表达。结果：与正常对照组相比，假手术对照组mGluR5 mRNA表达无明显改变（P0.05）。手术组mGluR5 mRNA各时间段表达均显著高于假手术对照组及正常对照组，缺血1 h其表达即有升高，比较差异均有统计学意义（P0.05）。结论：mGluR5在脑缺血后升高，提示mGluR5在脑梗死中有着重要作用，从而对我们的临床研究指出一条途径。 　　【关键词】 脑梗死； mGluR5； mRNA 　　谷氨酸是中枢神经系统中主要的兴奋性神经递质，其受体介导神经毒性作用[1-2]。本研究以线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型，采用原位杂交技术对鼠脑mGluR5 mRNA进行检测，来观察谷氨酸受体在脑梗死中的动态变化规律，以待从基因水平为脑梗死治疗提供理论依据，从而针对相应不同环节进行基因敲除，早期遏制缺血性脑损害基本环节，为脑梗死的防治提供从理论到实践的科学依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 mGluR5原位杂交检测试剂盒，胃蛋白酶，预杂交液，mGluR5寡核苷酸探针杂交液，封闭液，生物素化鼠抗地高辛，SABC-POD，生物素化过氧化物酶，DAB显色试剂盒，原位杂交专用PBS缓冲液。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 实验动物及分组 健康Wistar雄性大鼠75只，体重240～300g，由内蒙古大学动物试验中心提供。按照随机数字表法分为：正常对照组、脑缺血后1、3、6、12、24 h及3 d、14 d组（手术组）及相应的假手术对照组，每组5只。 　　1.2.2 动物模型制备 采用左侧大脑中动脉（MCAO）线栓法[3-4]。大鼠用3%戊巴比妥钠腹腔麻醉，取仰卧位固定于鼠台上，消毒后颈部正中切口，暴露左颈总动脉和颈内外动脉，结扎并切断颈外动脉，结扎翼腭动脉，血管夹夹闭颈内、颈总动脉，在颈总动脉近分叉处剪一约0.3 mm小口，将头部蘸硅橡胶的尼龙鱼线经小口处插入，沿颈内动脉入颅，进线从分叉处算约19～21 mm，稍感阻力时停止，此时已至大脑中动脉，结扎颈总动脉进线处，剪去多余的栓线，缝合手术切口。 　　1.2.3 脑组织的处理 于上述规定时间点，将大鼠深麻后快速断头取出脑组织，固定、脱水、浸蜡、包埋脑组织，再制成6 μm厚冠状切片。 　　1.2.4 进行原位杂交 将石蜡切片烤箱内过夜，经常规脱蜡至水，用胃蛋白酶混匀，经预杂交、杂交后洗涤，滴加封闭液、SABC及生物素化过氧化物酶，DAB显色后用苏木素复染后充分水洗，经酒精脱水、二甲苯透明后用树胶封片。 　　1.2.5 观察病理变化 在400倍显微镜视野下观察各组脑皮质缺血区相应的病理变化。 　　1.3 图像分析 采用江苏省捷达科技公司的形态分析系统进行图像分析，每张切片随机选取10个单位面积，测量原位杂交的灰度值。灰度值降低表明mGluR5 mRNA表达升高，灰度值越小，说明mGluR5 mRNA表达升高越明显，反之亦然。 　　1.4 统计学处理 采用SPSS 12.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，以P0.05）。手术组与正常对照组和假手术对照组相比，脑缺血后1 h缺血皮质区mGluR5 mRNA灰度值明显降低，即缺血皮质区mGluR5 mRNA胞浆内表达明显升高，比较差异均有统计学意义（P0.05）。手术组各时间点缺血皮质区mGluR5 mRNA胞浆内表达与手术组缺血6 h比较差异均有统计学意义（P0.05），说明单纯的手术操作对mGluR5 mRNA表达无明显影响。根据上述研究，可选择性地将mGluR5作为治疗脑缺血神经损伤的靶点，为脑梗死的防治提供了新的思路，具有一定的临床应用前景[11-12]。 　　参考文献 　　[1] Simonyi A J， Sun G Y. Changes in mRNA levels for groupⅠmetabototropec glutamate receptors following in utero hypoxiaischemia[J]. Brain Res Dev， 1999， 112（1）： 31-37. 　　[2] Maryse P， Fabiola M. Role of metabotropic glutamate receptor 5 signaling an