DNA重组技术的基本工具应用.pptVIP

实例：转基因抗虫棉 第一节 基因工程操作的工具 小结 * * * * * 什么叫基因工程？ 基因工程，又叫DNA重组技术或基因拼接技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传特性。 基因工程的概念 实质 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 1、基因工程的基本原理 2、基因工程的理论基础 3、基因工程的主要优点 细胞生物的遗传物质都是DNA； 生物共用一套遗传密码子； 生物的遗传都遵循中心法则； 克服了远源杂交不亲和的障碍； 目的性强，能定向地改造生物性状。 基因重组 知识回顾 抗虫棉 普通棉 想一想：基因工程培育抗虫棉的简要过程？ 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 棉花植株 导入 要解决的问题： 1、如何从苏云金芽孢杆菌中辨别出所需基因并把它切割下来； 2、如何将切割下来的抗虫基因与棉的DNA“缝合”起来。 基因的剪刀——限制性内切酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运输工具——运载体 “ ” 1、“分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 （1）来源： （2）作用： 主要从_________(如细菌)中分离出来 （4）举例： 原核生物 _____和切割DNA分子内__________ 识别 特定的核苷酸序列 即:一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。 （3）特点： 特异性 判断：所有的 限制性核酸内切酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列？ 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 小资料: 限制酶 例如：大肠杆菌(EcoRⅠ)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 切割具体部位: 磷酸二酯键 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 黏性末端 AAGCTT 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 G A A T T C C T T A A G C C C G G G G G G C C C EcoRⅠ 结果： 黏性末端（两侧切）和平末端（中心轴线切） SmaⅠ 想一想限制酶所识别的序列有什么特点？ 限制酶所识别的序列，无论是6个核苷酸还是4个核苷酸，都可以找到一条中心轴线（如图），中心轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称、重复排列的。 （中心轴线) 例3：同一种限制酶切割成的黏性末端是 A. ①② B. ①③ C. ①④ D. ②③ A 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考? 2、“分子缝合针” ——DNA连接酶 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，形成________________ 作用： 磷酸二酯键 原理： 催化磷酸二酯键形成 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 　 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 T4DNA连接酶 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 DNA聚合酶 DNA连接酶 区别1 区别2 相同点 寻根问底 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 2)将DNA双链上的两个缺口同时