发热病人血检操作规程.doc

发热病人血检操作规范 一、目的 发热病人血涂片显微镜检查（简称发热病人血捡），是疟疾诊断和虫种鉴别的主要方法，也是疟疾控制和监测的重要手段。为规范全球基金疟疾项目实施地区的发热病人血检技术方法，加强对发热病人血检质量控制和管理，制订本操作规范供实施。 二、血检操作技术 一血涂片的制作 1.所需设备 ⑴ 载玻片 玻片在使用前应清洗。新玻片应浸入有液态洗涤剂的清水中10～20分钟，用干净棉巾逐个擦拭，再放入盛有清水的容器中换水3～4次，最后用干净、柔软的棉巾将玻片擦亮。已用过的玻片应先浸泡于洗涤剂溶液中1～2天，或浸泡于煮沸的5%肥皂水中1～2小时，逐个擦去玻片上的旧血膜痕迹，用清水漂洗3～4次，再将玻片擦干、擦亮。洗净的玻片每20～30张用白纸包好后放入塑料袋内，保存于干燥环境中备用。 ⑵ 采血针 推荐使用一次性采血针。若使用可重复使用的采血针，在每次使用后都应清洗，并经高压或干热灭菌处理。 ⑶ 75％乙醇棉球 用于采血前后的消毒。 2.采血部位及取血方法 采血部位以耳垂较为合适，也可在手指末端采血，婴儿可从拇趾或足跟取血。先用75％乙醇棉球消毒取血部位，待干后，以左手拇指和食指轻轻捻转耳垂边缘或夹住被检者手指尖稍下方，右手持消毒刺针，迅速刺入取血部位1～2毫米深，然后用左手大拇指、食指和右手中指协同挤出血滴。 3.涂制血膜 取玻片2张，1张做载片，1张作推片（具有光滑边缘），用右手大拇指和食指夹持推片侧缘中部，用推片的左下角刮取血液4～5μl（约火柴头大小），再用该端中部刮取血液1～1.5μl。将左下角的血滴涂于载片的中央偏右，由里向外划圈涂成直径为0.8～1cm的圆形厚血膜（厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜）。用干棉球抹净角上的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两张玻片保持250～350角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜。推制时速度要均匀，血滴大小、推片与载片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄。制成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之间互相接触而不相互重叠。每张载玻片上分别做1个薄血膜，1个厚血膜。标准血膜的位置如下图所示。 标准血膜示意图 4.血膜染色前的处理 待血膜自然干燥后，用铅笔将受检者号码写在薄血膜上，然后用甲醇固定薄血膜并对厚血膜进行溶血处理。未处理血膜的放置时间夏天不宜超过48小时，冬天不宜超过72小时，否则厚血膜会自然固定且不能溶血，影响镜检。 二血膜的染色 1.吉姆萨（Giemsa）染液配制 吉姆萨粉 10g 甘油 500ml 甲醇 500ml 将吉姆萨粉10g置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，边加边磨，至500ml甘油加完研磨均匀为止，然后倒入1000ml 容量瓶中。每次加入少量甲醇至研钵中，多次洗涤研钵中的残留液，洗净为止，洗液和剩余甲醇均并入容量瓶中，塞紧瓶塞，充分摇匀，室温放置。每天用力摇动此溶液5分钟，3天后即可储存至玻璃瓶中塞紧备用。 2.缓冲液配制 溶液I：无水磷酸氢二钠 9.5g 蒸馏水加至1000ml 溶液II：磷酸二氢钾 9.07g 蒸馏水加至1000ml 将上述两种磷酸盐分别置于1000ml容量瓶中，分别加入部分蒸馏水摇匀使溶解后，再加入蒸馏水稀释至1000ml，充分摇匀。配就的溶液I和溶液II分别装入玻璃瓶中塞紧备用。临用时，根据选用pH的不同，按下表用量，再配制成不同pH的缓冲溶液用于染液的稀释和染色后的冲洗。 配制不同pH缓冲溶液的用量表 pH 溶液I用量(ml） 溶液II用量（ml） 稀释成总数（ml） 6.6 37 63 1000 6.8 49 51 1000 7.0 63 37 1000 7.2 73 27 1000 7.4 81 19 1000 根据选用的不同pH，将上述表中溶液I和溶液II的相应用量倒入1000ml容量瓶中，加入部分蒸馏水，混合摇匀后，再加入蒸馏水稀释至1000ml的刻度，塞紧瓶塞反复摇匀后，即配制成不同pH的缓冲溶液。 3.染色用水 常用染液的稀释用水和染色冲洗用水，是中性的蒸馏水或经煮沸过滤的冷开水。在没有蒸馏水的情况下，也可用井水、河水、泉水或雨水。因稀释和冲洗用水的pH在7.0～7.2时，染色的效果最佳。因此，也可选用临时配制的缓冲蒸馏水溶液，以取得较好的染色效果。 4.染色方法 ⑴ 单张血片染色 取蒸馏水或pH7.0～7.2缓冲液1ml加入吉氏染液1滴，混合均匀后，滴在厚、薄血膜上，染色20～30分钟，然后水洗、晾干。 ⑵ 成批血片染色 将血膜片朝一个方向插入染色缸中，或每对玻片血膜朝外，背靠背插入染色缸