细胞核及染色体5.pptVIP

 2、用非特异性微球菌核酸酶消化染色质，部分酶解片段分析结果 3、应用X射线衍射、中子散射和电镜三维重建技术 研究，发现核小体颗粒是直径为11nm、高6.0nm的扁园柱体，具有二分对称性（dyad symmetry），核心组蛋白的构成是先形成（H3）2 ·（H4）2四聚体，然后再与两个H2A·H2B异二聚体结合形成八聚体。 （二）核小体结构要点 1、核小体（nucleosome）：一种串珠状结构，由核心颗粒和连结线DNA两部分组成，通过酶消化实验建立。 ①每个核小体单位包括200bp左右的DNA超螺旋和一个组蛋白八聚体及一个分子H1。 ②由H2A、H2B、H3、H4各两分子形成八聚体，构成核心颗粒； ③146bp的DNA分子超螺旋盘绕组蛋白八聚体1.75圈, 组蛋白H1在核心颗粒 外结合额外20bp DNA，锁住核小体DNA的进出端，起稳定核小体的作 用。 包括组蛋白H1和166bp DNA的核小体结构又称染色质小体。 ④两个相邻核小体之间以连接 DNA 相连，典型长度60bp，不同物种变化值 为0～80bp。 ⑤组蛋白与DNA之间的相互作用主要是结构性的，基本不依赖于核苷酸的 特异序列，实验表明，核小体具有自组装（self-assemble）的性质。 ⑥核小体沿DNA的定位受不同因素的影响，进而通过核小体相位改变影响 基因表达 。 Localization of nucleosome is affected by two factors: （一）染色质包装的多级螺旋模型(multiple coiling model) 1、核小体：通过组蛋白DNA长度压缩7倍，形成直径11nm的纤维。即染色体的一级结构。 2、螺线管（ solenoid ）：由核小体螺旋化形成，每6个核小体绕一圈，长度压缩6倍；即染色体的二级结构。 3、超螺线管（ supersolenoid ） ：螺线管进一步螺旋化形成的直径为0.4μm的圆桶壮结构，长度压缩40倍。即染色体的三级结构。 4、染色单体 （chromatid）：超螺线管进一步螺旋折叠形成直径2～10 μm的结构。即染色体的四级结构。 压缩7倍 压缩6倍 压缩40倍 压缩5倍 5、DNA———→核小体———→螺线管———→超螺线管———→染色单体 solenoid Chromatin Packing （二）染色体的骨架-放射环结构模型(scaffold radial loop structure model) 对于更高级染色体包装方式，至今尚不明确。目前多认为30nm的纤维折叠为一系列的环（loop）结合在核骨架上（或称染色体骨架），结合点是富含AT的区域 。 ◆非组蛋白构成的染色体骨架(chromsomal scaffold)和由骨架伸出的无数的DNA侧环。 ◆30nm的染色线折叠成环, 沿染色体纵轴, 由中央向四周伸出，构成放射环。 ◆由螺线管形成DNA复制环，每18个复制环呈放射状平面排列， 结合在核基质上形成微带(miniband)。微带是染色体高级结构的单位，大约106个微带沿纵轴构建成子染色体。 Evidence for Scaffold Radial Loop Model * * 由X-射线晶体衍射(2.8A)所揭示的核小体三维结构（引自K.Luger等，1997） a. 通过DNA超螺旋中心轴所显示的核小体核心颗粒8个组蛋白分子的位置；b．垂直与中心轴的角度所见到的核小体核心颗粒的盘状结构； c．半个核小体核心颗粒的示意模型，一圈DNA超螺旋（73bp）和4种核心组蛋白分子，每种组蛋白由3 个α螺旋和一个伸展的N-端尾部组成。 N-端尾部有序排列，参与核小体之间的相互作用，以形成螺线管等高级结构。 4、SV40病毒微小染色体（minichromosome）分析 与电镜观察 核小体的性质及结构要点示意图（引自B.Alberts等） 在用微球菌核酸酶降解染色质时，反应早期可得到166 bp的片段，但不稳定；进一步降解则得到146 bp片段，比较稳定。推测可能原因是失去H1后，DNA两端各有10 bp的DNA，易被核酸酶作用而降解。 Sequence-specific DNA binding proteins DNA bending 三、染色质包装的结构模型 即染色体的二级结构。 染色体包装的不同组织水平 HeLa细胞去除组蛋白的中期染色体电镜照片 Loop *