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   植物水通道蛋白的生理特性 功能及研究进展 主要内容 1、植物水通道蛋白的发现及命名 2、植物水通道蛋白的结构 3、植物水通道蛋白的类型 4、植物水通道蛋白的生理功能 5、存在问题及展望 一、水通道蛋白的发现及命名： 1988年由Agre等从红细胞膜分离、纯化Rh血型多肽时偶然发现了一种相对分子质量为28 kD的疏水性膜内在蛋白,并根据其分子量命名该蛋白为形成通道的28 kDa膜整合蛋白,简称CHIP28。1991年从红细胞DNA文库中获得CHIP28的cDNA克隆后,推算其氨基酸序列,表明它属于一个功能未知的蛋白。1992年利用爪蟾卵母细胞表达系统结合脂质体重组技术证实了其水通道功能,第一次从分子水平上证实细胞膜上存在水转运通道蛋白。1997年CHIP28蛋白被人类基因组委员会正式命名为aquaporin-1(AQP1)。Agre因此获得了2003年度诺贝尔化学奖。 现在已在细菌、酵母、动物和植物中分离出许多水通道蛋白的同源基因,将其统称为水通道蛋白(AQPs)。Maurel等人于1993年从拟南芥中分离到水通道蛋白Y-TIP,它位于液泡膜上,其cRNA在爪蟾卵母细胞中异源表达时证明其具有水通道蛋白活性。这是植物中首次发现的水通道蛋白。1994年,Kommerloher等用拟南芥根质膜内在总蛋白产生的多克隆抗血清免疫筛选拟南芥cRNA文库得到几个阳性克隆,经鉴定为植物质膜内在蛋白。植物水通道蛋白的发现,使植物生理在观念上得以进步,有力地推动了对植物水分运输与保持的研究。 二、水通道蛋白的结构： 植物水通道蛋白的结构与动物水通道蛋白一样同属于一个古老的跨膜通道蛋白MIP（membrane instrinsic protein）这些膜蛋白的单体分子量在23-30KD之间,由6个跨膜结构域(通过五个环相连)和两端短的NH2、C端组成（图1，图2）。一些氨基酸残基在不同的AQP中很保守。AQP一级结构含6个跨膜区段并由5个环相连，含2个胞内环（B、D）和3个胞外环（A、C、E）其中B环和D环位于膜细胞质一侧，A环、C环和E环位于膜另一侧（图2）。 E环对外界环境非常敏感，可激活AQP功能。 B环和E环疏水性，其余环亲水性。AQP整个分子前后两部分在序列上相似，在膜上呈180度对称镜像结构，接近氨基酸和和羧基端的B环和E环各有由3个氨基酸（天冬酰氨-脯氨酸-丙氨酸）组成的基元，这是该蛋白家族成员共有的高度同源的特征性结构。B环和E环上的189位点和73位点均为汞抑制部位,并位于水通道核心部位即AQP口部附近的可能性大，由此推测AQP的结构呈沙漏模式（图2）。目前已知的植物AQP都是由4个对称排列的圆筒状亚基包绕形成的四聚体,四聚体每个单体都是功能独立的水通道,其中B和E环对水的选择通透性十分重要,其任何变异都会导致水通道活性下降,其中E环的 主要功能是激活AQP。 AQP的二级结构由40%—α螺旋和42%-43%的β片层及转角构成：它的三级结构以四聚体形式存在，每一个单体都是独立的功能性水通道，在膜上处于反向相对位置的B环和E环对构成功能性水选择性通透十分重要，E环和B环呈显著疏水，它们的任何变异都会引起水通道活性的下降。 三、植物水孔蛋白的类型: 植物中第1个水孔蛋白Y-TIP是由Maurel等人于1993年从拟南芥中分离出来的。目前,已在拟南芥、烟草、玉米、豌豆、大麦、滨藜、番茄、甜菜、西葫芦及向日葵、甜椒、含羞草等植物中发现了AQP。根据氨基酸序列的同源性,将植物水孔蛋白分为4类:质膜内在蛋白(PIPs),液泡膜内在蛋白(TIPs),根瘤菌共生膜上的内在蛋白NOD26(NLMs)和小分子碱性内在蛋白(SIPs)。 四、植物水通道蛋白的生理功能: （1）水孔蛋白在跨细胞长途水分运输中的作用。水从植物根到叶的长距离运输有3不同的平行途径：共质体途径（symplastic pathway）、质外体途径(apoplastic pathway）、跨细胞途径(transcellular pathway）.根据组织类型及发育状况的不同，不同的途径对组织整体水透性的贡献不一样。水孔蛋白，尤其是原生质膜上的水孔蛋白，在控制水分的跨膜运输中起着主要作用。根内皮层细胞壁上的凯氏带对水分辐射运输形成障碍。因此根的皮层或内皮层，质外体水分流动必须进入共质体。 在拟南芥中，PIP1水孔蛋白在根内皮层中的表达高于在根皮层中的表达，这与后一种可能性非常符合。木质部薄壁细胞也是水孔蛋白高度表达的地方，在控制水分的渗透和水压运动过程中起着重要的作用。 在研究水孔蛋白在水分长途运输过程中的作用时，人们使用氯化汞来抑制水孔蛋白的活动。氯化汞抑制膜水孔蛋白的机理是氯化汞能与水孔蛋