第四章--消毒与灭菌.pptVIP

第四章 消毒和灭菌 第四章 消毒和灭菌 第一节 灭菌的原理和方法 第一节 灭菌的原理和方法 第一节 消毒和灭菌 第一节消毒和灭菌 第一节消毒和灭菌 第一节消毒和灭菌 第一节消毒和灭菌 第一节消毒和灭菌 第一节消毒和灭菌 第一节消毒和灭菌 常压间歇灭菌是将灭菌培养基放入灭菌器内，每天加热100 ℃，30 min，连续3 d. 第一天加热后，其中的营养体被杀死，将培养物取出放室温下18～24 h，使其中的芽孢发育成营养体，第二天再加热100 ℃，30 min，发育的营养体又被杀死，但可能仍留有芽孢，故再重复一次，使彻底灭菌。 第六章 消毒和灭菌 第六章 消毒和灭菌 * * 微生物学上，灭菌和消毒的含意是不同的。 1. 灭菌是指用物理或化学的方法，完全除去或者杀死器物表面和内部的一切微生物。 2. 消毒是指消灭或减少病原微生物以防止侵染，而不是消灭所有的微生物。消毒还有其他作用，如进行分离工作时，植物组织往往要经过表面消毒，目的是消灭组织表面的杂菌而保存组织内的病原菌。 灭菌是微生物学研究工作的基本操作。菌类的纯培养和其他方面的工作，所用的玻璃器皿、培养基和各种操作工具如刀剪等，都要经过灭菌。 灭菌方法有热力灭菌、过滤灭菌、化学灭菌和辐射灭菌等。 利用高温杀菌是最重要的灭菌法。这个方法又可分为干热灭菌法和湿热灭菌法。 一、热力灭菌 热力灭菌的原理： 热力灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 湿热灭菌与干热灭菌比较，湿热的效率比较高。例如，培养皿用干热灭菌要在160～170℃，时间长1～2h。，湿热灭菌则只要在121 ℃处理20 min。 一、热力灭菌 （一）干热灭菌 干热灭菌有火焰烧灼灭菌和热空气灭菌两种。 1. 火焰烧灼灭菌 适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，无菌操作时的试管口和瓶口也在火焰上作短暂烧灼灭菌。涂布平板用的三角玻棒也可在蘸乙醇后进行灼烧灭菌。 第一节 灭菌的原理和方法 一、热力灭菌 2. 热空气灭菌 在烘箱内利用高温干燥空气(160～170 ℃)进行灭菌。 即将要灭菌的器物放在电烘箱中加热，其温度可以调节，有的还有鼓风设备，使箱内的温度更加均匀。此法适用于玻璃器皿如吸管和培养皿等的灭菌。干热灭菌的温度一般是在160～180℃间，不宜超过180 ℃，常用的温度是165 ℃。 干热灭菌的应用是很有限的。高温处理易于损坏的和含水的物品，都不能用干热灭菌。 一、热力灭菌 干热灭菌步骤： ① 将所要灭菌的物品包裹后放入烘箱加热， ② 温度达到160～170 ℃（常用温度165 ℃）计时 ③ 按照不同灭菌物品所需灭菌时间进行灭菌（一般1-2 h），灭菌后待温度下降到60 ℃以下时才能开门，否则内外温度相差很大，易引起玻璃器皿的破碎。 一、热力灭菌 进行干热灭菌要注意以下问题： ① 物品不要摆得太挤，以免妨碍空气流通； ② 灭菌物品不要接触烘箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火； ③ 在升温过程中，如果红灯熄灭，绿灯亮，表示箱内停止加温； ④ 电烘箱内温度未降到60 ℃以前，切勿自行打开箱门，以免骤然降温导致玻璃器皿炸裂。 ⑤ 干热灭菌温度不能超过180 ℃，否则包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 Attention! （二）湿热灭菌 * 湿热灭菌分为 1.高压蒸汽灭菌法, 2.常压蒸汽灭菌法，加压的作用是提高蒸汽的温度。注射器和挑取孢子的玻璃针等放在沸水中煮既是一种不加压的湿热消毒方法，但一般所谓湿热灭菌主要是指高压蒸汽灭菌。 （二）湿热灭菌 * 1.??高压蒸汽灭菌法 原理： 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100 ℃的温度，导致菌体蛋白质疑固变性而达到灭菌的目的。这种灭菌适用于培养基、工作服、橡皮物品等，也可用于玻璃器皿的灭菌。 （二）湿热灭菌 * 1.??高压蒸汽灭菌法 温度和时间： 一般培养基以0.1 MPa，121 ℃灭菌20 min即可。 灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。例如含糖培养基用0.06 MPa、112 ℃灭菌15 min，但为了保证效果，可将其他成分先行0.