生物制药 第七章 氨基酸类药物.ppt

第七章 氨基酸类药物 氨基酸类药物包括天然的氨基酸和氨基酸混合物以及氨基酸的衍生物，全世界的氨基酸总产量已逾百万吨／年，年产值达几十亿美元。 氨基酸类药物有单一氨基酸制剂和复方氨基酸制剂两类。 复方氨基酸制剂有三类：①水解蛋白注射液，由天然蛋白经酸解或酶解制成的复方制剂；②复方氨基酸注射液，由多种单一纯品氨基酸根据需要按比例配制而成，有时还添加高能物质、维生素、糖类和电解质；③要素膳，由多种氨基酸、糖类、脂类、维生素、微量元素等各种成分组成的经口或鼻饲，为病人提供营养的代餐制剂。有些氨基酸的衍生物具有特殊医疗价值。 1.氨基酸口服液 [处方] 新鲜茧蛹 10 kg 4 mol／L硫酸 10 kg 石灰乳 适量 [制法] 称取新鲜的茧蛹，用组织粉碎机绞碎，以滤布或适宜滤器过滤，除去残渣。 滤液放入搪瓷罐内或适宜的容器内，按1∶1的比例，加入4mol／L硫酸液，搅拌均匀，盖严。将容器放入高压锅内，通入蒸汽，以110℃高温高压水解8~10h。 取已水解的上清液少许，用双缩脲法检查，是否有肽键反应，如无兰红色的出现，说明水解反应已完成。 冷却后，用石灰乳中和硫酸，边加边搅拌，待中和到pH4.0时，要小心操作，继续用石灰乳中和，调节到pH值5.5时即可。 趁热过滤，除去硫酸钙沉淀，向滤液中加入0.5%活性炭，煮沸5~10min，脱色除杂质。 再趁热过滤，得浅黄色溶液，并保持滤液温度在60~80 ℃，待含量测定后，调整溶液浓度为3％，搅匀，灌装，密封即得。 2. 谷氨酸发酵生产 谷氨酸发酵生产菌种主要有棒状杆菌属、短杆菌属、小杆菌属及节杆菌属的细菌。除节杆菌外，其他三属中有许多菌种适用于糖质原料的谷氨酸发酵。这些细菌都是需氧微生物，都需要以生物素为生长因子。 我国谷氨酸发酵生产所用菌种有北京棒状杆菌AS1299、钝齿棒状杆菌AS1542、HU7251及7338、B9等。 菌种扩大培养 （1）一级种子培养 采用液体培养基，由葡萄糖、玉米浆、尿素、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸铁及硫酸锰等组成，pH为6.5～6.8；三角瓶内32℃振荡培养12ｈ，贮于4℃冰箱备用。 （2）二级种子培养 培养基除用水解糖代替葡萄糖外，其他与一级种子培养基相仿。种子罐内32℃通气搅拌培养7～10ｈ，即可移种或冷却至10℃备用。 谷氨酸发酵生产 发酵初期，菌体生长迟滞，约2～4ｈ后即进入对数生长期，代谢旺盛，糖耗快，这时必须流加尿素以供给氮源并调节培养液的pH值至7.5～8.0，同时保持温度为30～32℃。 本阶段主要是菌体生长，几乎不产酸，菌体内生物素含量由丰富转为贫乏，时间约12ｈ。 随后转入谷氨酸合成阶段，此时菌体浓度基本不变，糖与尿素分解后产生的ａ-酮戊二酸和氨主要用来合成谷氨酸。 这一阶段应及时流加尿素以提供氨及维持谷氨酸合成最适pH7.2～7.4，需大量通气，并将温度提高到谷氨酸合成最适温度34～37℃。 发酵后期，菌体衰老，糖耗慢，残糖低，需减少流加尿素量。当营养物质耗尽、谷氨酸浓度不再增加时，及时放罐，发酵周期约为30ｈ。 谷氨酸提取 谷氨酸提取采用的是等电点--离子交换法。谷氨酸的等电点为出3.22，这时它的溶解度最小，所以将发酵液用盐酸调节到pH3.22，谷氨酸就可结晶析出。 晶核形成的温度一般为25～30℃，为促进结晶，需加入ａ型晶种育晶2ｈ。 等电点搅拌之后静置沉降，再用离心法分离得到谷氨酸结晶。 剩余的谷氨酸可用离子交换法，进一步进行分离提纯和浓缩回收。谷氨酸是两性电解质，故与阳性或阴性树脂均能交换。当溶液pH低于3.2时，谷氨酸带正电，能与阳离子树脂交换。 目前国内多用国产732型强酸性阳离子交换树脂来提取谷氨酸，然后在65℃左右，用6% NaOH溶液洗脱，pH3～7的洗脱液作为高流液，返回等电点法提取。 * *