2014年暑期微生物实习内容-修改.docVIP

微生物学假期综合教学实习 实习时间： 2014年 7 月 2 日 开始 实习班级： 32 人 生命科学技术学院微生物教研室 微生物教学实习基本实验流程 配制牛肉膏固体培养基、3倍和单倍乳糖发酵液， 准备无菌水及各种器皿、器材 采集样品 综合本实验的六项结果（细菌总数、乳糖管初发酵（MPN）、伊红美兰平板鉴定、 E.C平板鉴定、革兰氏染色、乳糖复发酵），写出实验报告 清洗器材，并做好室内清洁。 微生物学综合教学实习 学习目的：应用所学的微生物学知识，按一定的方向，学生自己设计实验路线、实验方法，培养组织和实施实验的独立工作能力、科研思维和动手能力；建立团队成员间的合作、交流与探讨氛围。 学习内容：本实验以自来水、天然水样、食品、饮料为检测对象，考察被检测样品中的细菌总数、大肠菌群数量、基本形态及生理特征、有无粪大肠菌群等微生物学特征。对被检测样品的卫生状况做出评价。同时，通过实习熟练掌握相关的微生物技术。 背景介绍：大肠菌群并非细菌学分类命名它不代表某一个或某一属细菌，国家饮用水标准规定：大肠菌 自来水3个L； 饮用水源100个/ml 大肠菌群的共同特点是：发酵乳糖产酸产CO2气体。水源大肠菌群数量检测有多管发酵法（MPN法）和滤膜法。 在37℃培养生长的大肠菌群，包括在粪便内生长的大肠菌群称为“总大肠菌群”(Total?coliform)；在44．5℃仍能生长的大肠菌群，称为“粪大肠菌群”(Fecal?coliform)，它直接来自粪便，在44-44．5℃的高温条件下仍可生长。 在自然环境中生活的大肠菌群培养的最合适温度为25℃左右，在37℃培养仍可生长，但温度再升高至44．5℃，则不再生长。因此，可用提高培养温度方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分。 粪大肠菌的鉴别方法：将接种EC肉汤管在44.5±0.5℃培养24±2h。EC肉汤管粪大肠菌群试验阳性；不产气管为粪大肠菌群试验阴性。第一天实验 本日内容：全班同学平均分散到4个实验台面上，分别准备如下培养基和器材 （培养基配方在本讲义后面）： 第1实验台： 配三倍浓缩乳糖发酵液，分装到试管和小蓝盖瓶中。 1、试管每管装5ml（要用移液管或移液器定量），管中加一倒立杜氏小管（开口朝下），塞胶塞。（共装 220 支 / 班） 2、用200ml大蓝盖瓶每瓶装50ml（用量筒定量）。 （共装 20 瓶/ 班） 第2实验台： 配牛肉膏蛋白胨固体培养基，200ml / 瓶（琼脂粉添加量为1.5%）。（共配 32 瓶 / 班） 另配牛肉膏蛋白胨固体培养基1100ml，装试管110支，灭菌后摆斜面。 第3实验台： 配单倍乳糖发酵液，分装到试管中，每管10ml，管中加一倒立杜氏小管（开口朝下），塞胶塞（要用移液管或移液器定量）。 （共装 350 支 / 班） 第4实验台： （1）纸包5ml或10ml 塑料吸头 ，10-11支/ 包 （ 10 包/ 班） 塑料盒装1ml塑料吸头。 （ 10 盒 / 班） 塑料袋装1.5 ml离心管，10个/ 包 （ 10 包 / 班） （2）空的200ml大蓝盖瓶，灭菌后供采水样用。 （ 16 瓶/ 班） （3）用200ml大蓝盖瓶装自来水，量筒定量，90ml / 瓶 （ 32 瓶/ 班） 用80ml小蓝盖瓶装自来水，50ml / 瓶 （ 10 瓶/ 班） 另用500ml三角瓶装自来水，225ml / 瓶，瓶中加玻璃珠10-15粒。 （ 10 瓶/ 班） 试管装自来水，9ml / 管（要用移液管或移液器定量） （ 40 管/ 班） （4）报纸包培养皿，每筒10套单倍、3倍乳糖发酵液的灭菌工艺条件为115, 20 min。 下午由值日同学从灭菌锅拿出，放到实验室边台上，分类摆放。 第二天实验 一、本日内容：初发酵试验，每4个同学为一个实验组（个别组可3或5人），头天下午或当天采样，检测如下样品中的大肠菌群数和细菌总数，实验结果4人共享。 1、南湖水（或其他水域样品） 2、自来水 3、市售豆奶（或奶茶、豆浆等饮料） 4、市售热干面（或凉粉等其他凉拌食品） 二、每小组（4人）本日所需器材： 采样用空大蓝盖瓶：2瓶