生物物理学2015年第十二讲+干细胞的研究进展.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * 研究肿瘤干细胞的意义 有望代替肿瘤细胞系，成为更加理想的肿瘤研究工具。 用于研究肿瘤的发生机制，有助于研究观念的转变及对肿瘤本质的理解。 为临床有效地诊断出恶性生长细胞的存在部位并进行有效治疗，提供了新的思路。 Clinical Application of SC 干细胞应用(干细胞工程) Stem Blood Cells造血干细胞移植 在近30年里迅速发展壮大，为白血病、再障、先天免疫缺陷病等提供了崭新的、卓越有效的治疗方法。 * 脐带血的干细胞自我繁殖能力最强，繁殖速度最快，骨髓细胞次之。 脐带血中干细胞比率最大，骨髓细胞次之。 * 1、细胞悬液的制备 将干细胞所在的动物组织材料制备成单细胞悬液。 组织的提取 确定所需要的干细胞在机体中存在的部位，并取得这个部位的组织，这样即可获得目的干细胞同时又可达到初步富集的作用。 干细胞体外培养技术 * 细胞悬液的制备 吸管、针头吹打 组织研磨器研磨 不锈钢或尼龙网搓洗 胰蛋白酶消化 螯合剂处理 不含Ca2+、Mg2+的缓冲溶液泡 机械分离： 酶法解离： * 细胞分离 指将组织材料分散制成细胞悬液 后，从中获取目的细胞的过程。 细胞纯化 从原代培养成分混杂的异质性细胞悬液 中或者从培养物中获得单一类型的细胞 的过程。 2. 干细胞的分离纯化 * 主要是根据不同细胞所具有的各自特性来实现 物理特性 密度、体积、电荷等 化学特性 特异性表面标志和功能 分离纯化的原理 * * 液氮保藏法 原理：细胞在-130℃下代谢作用停止。液氮的温度可达-196℃，可使细胞的代谢活动停止，化学作用消失。 保护剂：防止细胞破裂 甘油 二甲基亚砜(DMSO) 3、干细胞的冻存与复苏 * 冻存复苏方法 冻存：细胞悬液+保护剂→缓降温1℃/min，至 -25℃→再置-70℃～-80℃低温冰箱,过夜→-196℃液氮长期保存。 复苏：直接取出冻存管（-196℃）→立即置37℃水浴→1～2 min内融化→倒入含培养液离心管→洗涤去除保护剂→细胞转入培养瓶中培养。 * 干细胞的体外培养 即将上述从机体的组织中分离纯化得到的单个干细胞，给予必要的生长条件，模拟动物体内生长环境，使其在体外继续生长和繁殖。 4. 干细胞的体外培养条件 * （1）营养要求： 氨基酸、碳水化合物、维生素及一些无机离子、生长因子等。 （2）环境条件： 温度：哺乳动物细胞适宜的体外培养温度为35～37℃，一般控制37±0.1℃。 体外培养条件 * 渗透压：多数细胞有一定的耐受渗透压能力，可在培养基配制时加以控制。 气相：需要有氧条件，氧分压维持略低于大气状态，此外，还需CO2。 pH：各种细胞对pH要求不尽相同，多数细胞pH 7.2～7.6间生长良好。 环境无毒和无菌 ：对培养用的容器清洗和消毒，对培养基除菌及灭菌。以防止真菌、细菌及支原体的污染。 * 悬浮培养 指细胞在培养皿中自由悬浮生长的过程。用于非贴壁依赖型细胞。 贴壁培养 必须黏附在固体介质表面上生长的细胞培养。 固定化培养（微载体培养系统）即适用于贴壁依赖型细胞,又适用于非贴壁型依赖性细胞的包埋培养方式。 体外培养类型 * 干细胞移植与心肌梗死的治疗 心脏疾患的治疗 修复缺血或损坏的心肌并使心肌细胞 再生 * * 干细胞技术的一系列应用 Prospect of Stem Cells 干细胞研究展望 * 长生不老的希望? 假如在年老时能使用上自己或他人 婴幼儿或青年时期采集保存的干细 胞，那么人类长期追求的长生不老 的幻想就有可能成为现实。 干细胞研究遇到的问题 如何有效的诱导干细胞定向分化 如何克服排斥反应 如何解决干细胞向癌细胞发展 著名科学家Zon 对于干细胞科学，我们还处在黑 暗的年代 (the Dark Ages) 干细胞技术 – 细胞的炼丹术 * IF = 23.5 Cell Stem Cell * The End * n336547947.shtml 大连理工大学0802生物工程 30分25秒开始 * * * * * 胚泡 内细胞群 * 5-9周的内细胞群，多能干细胞 体细胞核转移（SCNT） 　　去核卵细胞 + 体细胞核 ?克隆 ?囊胚 ?分离内细胞群 ? 多能干细胞 除精子外的任何体细胞 * 体细胞核转移技术（SCNT） * Gearhart的工作 1