酶促法制备茶黄素工艺初步的研究 .docVIP

毕 业 论 文（设计） 题 目 酶促法制备茶黄素工艺初步研究 指导老师 专业班级 生物技术及应用0701 姓 名 学 号 2010 年 5 月 30 日 摘　要 研究利用绿茶鲜叶浆及梨汁为酶源，采用体外氧化中酶促法来制备茶黄素。方法：采摘新鲜茶叶，阴凉干燥处摊放12h，-18℃以下冰柜冷冻6h，组织捣碎机粉碎匀浆，添加新鲜梨汁，并柠檬酸调pH值至4.7；茶多酚40g，加入乙酸乙酯溶解。将上述两部分液体，迅速混匀，加入发酵罐中，温度25℃，pH值4.7，通入空气流量0.6L/min，高速搅拌，发酵60min。再进一步分离两相，制备得到茶黄素。结论：经过液相检测，本文酶促法制备茶黄素工艺可以制得茶黄素，茶黄素主要在乙酸乙酯相中，含量6.86%。 关键词：茶黄素； 茶多酚； 体外氧化； 酶源； 发酵 目 录 引言1材料…………………………………………………………………………………2 1.1实验料.1.2底物处理…………………………………………………………………………3 2.1.3发酵（酶促反应）………………………………………………………………3 2.1.4茶黄素萃取………………………………………………………………………3 2.1.5茶黄素纯化………………………………………………………………………4 2.2检测方法……………………………………………………………………………4 3结果与分析…………………………………………………………………………5 3.1检测结果…………………………………………………………………………5 3.1.1茶黄素对照品图谱…………………………………………………………5 3.1.2酶促发酵茶黄素浓度检测……………………………………………………5 4总结与讨论………………………………………………………………………6 参考文献 新鲜茶叶（1芽2-3叶，产于浙江杭州）；梨（购于华联超市）；茶多酚（浙江绍兴东灵保健食品有限公司提供，TP≥98%） 1.2实验试剂 柠檬酸，乙酸乙酯，冰醋酸：分析纯 食用乙醇 乙腈：色谱纯 蒸馏水：由纯水器Ultra pure plus制得 AB-8大孔吸附树脂 1.3实验仪器 组织捣碎机（878-B 上海正慧工贸有限公司） 电子天平（JY10001 上海华岩仪器公司） 分析天平（AR2140 上海力衡仪器仪表有限公司河南兄弟仪器设备有限公司---------------------------公式（2.1） 3结果与分析 3.1检测结果 3.1.1茶黄素的对照品图谱 按照2.2检测方法，分析检测茶黄素单体对照品，检测HPLC图谱图3.1所示： 图3.1　茶黄素4种单体对照品HPLC检测图谱 由图3.1不难发现，4种茶黄素单体对照品出峰时间依次为30.005、42.697、53.102、57.027min，详细的样品浓度与对应出峰积分面积如表3.1所示。 表3.1　茶黄素单体对照品进样浓度及对应峰面积 单体 保留时间 RT 峰面积area 进样浓度 mg/ml TF1 30.005 4050051 0.240 TF2A 42.697 4452548 0.325 TF2B 53.102 1071110 0.135 TFDG 57.027 6847370 0.460 3.1.2酶促发酵茶黄素浓度检测结果 将按照2.1操作方法制备茶黄素溶液冷冻干燥，获得茶黄素粉末样品按照2.2操作方法进行HPLC检测，检测茶黄素浓度含量如表3.2。 表3.2　酶促法制备所得茶黄素样品HPLC检测结果 样品 检测物质 保留时间 样品峰面积 对照品峰面积 对照品 浓度 样品浓度 茶黄素浓度 水相25% 洗脱 TF1 30.53 208009 4050051 0.240 0.01233 0.0387 TF2A 43.21 175867 4452548 0.325 0.01284 TF2B 53.58 67738 1071110 0.135 0.00854 TFDG 57.78 74028 6847370 0.460 0.00497 水相70% 洗脱 TF1 30.74 653288 4050051 0.240 0.03871 0.0804 TF2A 43.64 271655 4452548 0.325 0.01983 TF2B 54.17 110312 1071110 0.135 0.01390 TFDG 58.50 118355 6847370 0.460 0.00795