dna的蛋白质技术.pptxVIP

DNA与蛋白质的提取 提取DNA利用的是DNA、RNA、蛋白质和脂质的理化性质的差异。具体地说，DNA与其他物质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，再通过冷酒精进一步去除其他杂质。另外DNA对高温和洗涤剂的耐受性较高，不易被破坏。鉴定时可采用二苯胺试剂沸水浴加热呈蓝色来判断DNA的存在。提取与分离蛋白质是根据蛋白质的分子形状和大小，所带电荷的性质和多少，溶解度、吸附性质以及对其他分子的亲和力等理化性质，将不同种类的蛋白质分离开。凝胶色谱法可以将相对分子质量不同的蛋白质有效分离。DNA与蛋白质的提取技术比较电泳法可将带有不同电荷的蛋白质分离。DNA血红蛋白材料选取鸡血细胞等DNA含量相对较高的生物组织哺乳动物的成熟红细胞细胞破碎加蒸馏水、加洗涤剂和食盐搅拌、研磨加蒸馏水和甲苯充分搅拌去除杂质①用不同浓度的NaCl溶液处理②用酒精溶液处理③用蛋白酶处理①透析处理②纯化处理鉴定加入二苯胺，沸水浴SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量PCR技术与凝胶色谱法的比较 PCR凝胶色谱法过程变性：90 ℃以上高温解旋↓复性：50 ℃左右引物与单链结合↓延伸：72 ℃合成子链凝胶色谱柱的制作↓装填：凝胶装填均匀，无气泡↓纯化酶需要热稳定性高的TaqDNA聚合酶不需要酶温度高温常温DNA粗提取与鉴定中不同试剂的用途及原理比较 试剂质量浓度用途原理NaCl溶液2 mol/L溶解DNAD