DNA的粗提取及鉴定1.pptVIP

* 讨论3：如何证明他们是遗传物质？ 讨论2：构成生物体的遗传物质是什么？ 讨论1：什么是生物大分子？ 主要指蛋白质、核酸和多糖等 知识回顾 讨论4：提取生物大分子的基本思路? 选用一定的物理或化学方法分离具有不同 物理或化学性质的生物大分子 讨论6：提取DNA的基本思路？ 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分 （一）DNA的提取原理 1、DNA在盐溶液中的溶解性 　　DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的______溶液中溶解度不同，利用这一特点选择适当的_______就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。 NaCl 盐浓度 阅读P54—55相关内容，找出提取和纯化DNA的原理有哪些？ 基础知识 　　①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下， DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 在NaCl溶液浓度低于_____________时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而____________；在______________时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又___________。 0.14 mol/L 逐渐降低 0.14 mol/L 逐渐增大 思考： ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 当氯化钠的物质的量浓度为________ 时，DNA的溶解度最大，浓度为_____________ 时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。 2mol/L 0.14 mol/L 　　DNA不溶于__________，但是细胞中的某些蛋白质则可以溶于其中。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离，从而提纯DNA。 酒精溶液 2、DNA在酒精溶液中的溶解性 DNA ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对____ 没有影响。 ②大多数蛋白质不能忍受60～80 ℃的高温，而DNA在______以上才会变性。 ③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除_______和________,但对DNA没有影响。 利用以上原理可以将DNA与蛋白质进一步分离。 80℃ 脂质 蛋白质 3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 洗涤剂是离子去污剂，能够瓦解细胞膜，有利于DNA的释放。 洗涤剂瓦解细胞膜的过程是乳化作用。乳化作用是将一种液体分散到第二种不相溶的液体中去的过程，最大一类的乳化剂是肥皂、去污粉和其他化合物，其基本构造系末端是极性基团的烷烃链，可以将脂质乳化为形成较小的脂质微粒。 ①在_______的条件下，DNA与______ 反应呈蓝色。 ③紫外灯照射法。 A、用蒸馏水配制万分之五的溴化乙（EB）染色剂。 B、将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴一滴EB溶液染色。 C、将蜡纸放在紫外灯(260 nm)下照射（暗室中），可见橙红色的荧光(DNA的紫外吸收高峰在260 nm处) ② 甲基绿可将DNA染成________。 （二）DNA的鉴定原理 沸水浴 二苯胺 绿色 （一）实验材料的选取 2、供选材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材料） 1、选取材料的原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对________的生物组织，成功的可能性更大 较高 实验设计 能否选用哺乳动物成熟的红细胞？ （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、动物细胞的破碎和DNA的收集方法。 动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的________，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA 蒸馏水 思考： 植物细胞（如洋葱）需要先加入一定的________和______进行充分地搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。 1、加入洗涤剂和食盐的作用分别什么？ 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。 洗涤剂 研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。 2、如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 食盐 2、植物细胞的破碎和