原核生物基因表调控生物化学与分子生物学教案.docVIP

第二节 转录的调节控制 一、原核生物转录的调节控制 1．操纵子的结构和调控 原核生物的不少基因在加入诱导物后mRNA迅速合成，随之酶滞后合成。当去除诱导物时mRNA的合成很快停止，但酶的合成延迟停止。 构建部分二倍体（lacI-/FlacI+）。 lacs为阻遏蛋白不可诱导性突变，其阻遏蛋白失去诱导物结合位点； lacI-突变的阻遏蛋白不能形成寡聚物； lacI-d突变的阻遏蛋白不能和DNA结合，且呈负互补（反式显性）； Oc操纵基因的突变使结构基因组成型表达。 由此提出操纵子学说。 （1）大肠杆菌乳糖操纵子的结构 大肠杆菌乳糖操纵子的作用方式 乳糖操纵子的降解物阻遏和降解物基因活化蛋白（CAP）的作用。 CAP二聚体与DNA的相互作用引起DNA的弯曲。红色为与CAP相互作用的磷原子， cAMP为红色。 乳糖操纵子包括三个结构基因（Z、Y、A），三个调控基因（启动基因、操纵基因和CAP蛋白结合位点），以及一个调节基因。调节基因编码阻遏蛋白，阻遏蛋白与操纵基因结合可阻止RNA聚合酶对结构基因的转录。当乳糖存在时，由乳糖转化而成的别乳糖与阻遏蛋白结合，导致阻遏蛋白与操纵基因解离，诱导基因的转录。但是阻遏蛋白脱离操纵基因而解除封闭后，如果没有CAP的作用也不能启动转录。细胞内葡萄糖缺乏、cAMP水平升高时，cAMP与CAP结合形成复合物，并与CAP结合位点结合，可促进RNA聚合酶与启动基因结合并启动转录。所以，乳糖操纵子的诱导作用既需要乳糖的存在又需要葡萄糖的缺乏。当操纵基因突变后，阻遏蛋白即不能与操纵基因结合，结构基因会组成性表达。 （2）基因表达的调控方式 （3）araBAD操纵子的正调控和负调控 araBAD操纵子的作用机制 （4）大肠杆菌的色氨酸操纵子 特点: （1） trpR（89’）和trpABCDE（25’）不连锁； （2） 操纵基因在启动子内； （3） 有衰减子（attenuator）； （4） 启动子和结构基因不直接相连，二者被前导顺序（Leader）所隔开。 调节： （1） Trp为辅阻遏物（corepressor）； （2）阻遏物和RNA pol 在P,O重叠区产生竞争性抑制； （3）阻遏物的阻遏能力低，是LacR的1/1000； （4）trpO调节合成代谢，存在衰减作用。 色氨酸操纵子的阻遏物辨认三种操纵基因。 色氨酸操纵子转录本前导区二级结构的变换 缺乏多种氨基酸则前导肽不能合成，转录被终止。 色氨酸含量很低，但不缺乏其他氨基酸时，前导肽的合成在色氨酸密码子处停顿，不形成终止子，转录可以完成。 有高浓度色氨酸存在时，前导肽顺利合成，核糖体占据1和2，使3和4形成发夹结构，转录被终止。 色氨酸操纵子衰减作用的机制 几种氨基酸合成操纵子的衰减作用前导肽的氨基酸序列 3．基因表达的时序调控 λ噬菌体基因表达的时序调控研究较深入，其50个基因组成4个操纵子，即阻遏蛋白操纵子，左右两个早期操纵子和晚期操纵子，左向转录的为L链，右向转录的为R链，当λ噬菌体侵入宿主细胞后，前早期和后早期的基因首先表达，随后，若晚期基因表达，噬菌体进入裂解循环，若合成阻遏蛋白，则进入溶原状态。右早期操纵子的调节基因cro可抑制溶原型阻遏蛋白cI的合成，使噬菌体进入裂解循环，左早期操纵子的调节基因N的表达产物为抗终止子，使前早期基因的转录越过终止信号进入后早期基因，后早期基因包括左右早期操纵子的3个调节基因，cⅡ/cⅢ与建立溶原状态的阻遏蛋白的合成有关，Q调节基因的产物亦为抗终止子，使晚期基因表达，噬菌体进入裂解循环。 基因表达的时序调控是发育生物学的基础。