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ERα调节剂高通量筛模型的建立
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ERα调节剂高通量筛选模型的建立
张倩1 郑智慧2 路新华2范玉玲2水小溪1 赵宝华1 张华2 贺建功2
(1.河北师范大学 生命科学学院 河北 石家庄 050016
2.华北制药集团新药开发有限责任公司 河北 石家庄 050013)
摘要: 目的 建立一个基于哺乳动物单杂交的报告基因的细胞瞬时转染的ER调节剂高通量筛选模型。方法 利用RT-PCR 技术从脂肪的总RNA 中扩增ERα基因配体结合区(ligand bingding domain ERα LBD)序列,构建表达载体pBind-ERα的嵌合表达载体。与含GAL4相应元件的报告质粒共转染细胞系,通过检测荧光素酶基因的表达状况评价化合物对ERα的调节活性。结果 成功构建pBind-ERα表达质粒,并且通过报告质粒与表达质粒之间的比例和宿主细胞条件的优化,得到了最佳的共转染条件。在该模型上激动剂阳性药雌二醇能剂量依赖地提高荧光素酶的表达,最大上调倍增数超过25倍;拮抗剂阳性药它莫昔芬能有效地拮抗雌二醇的活性,最大拮抗活性可达8倍。此外该模型被微量化为384孔板。结论 ER调节剂的筛选模型灵敏、稳定,可以快速进行多种来源的化合物药物的筛选。
关键词 ERα, 激动剂,拮抗剂,共转染, 高通量筛选
ABSTRACT: OBJECTIVE Estrogen Receptor (ER) are a member of superfamily of ligand-activated transcription factors which play critical roles in many biological processes, to screen the modulator of Estrogen Receptor alpha for mechanism research and drugs development, a high-throughput screening model of Estrogen receptor alpha modulator based on the Transient transfect
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