法医DNA论与技术.doc

第十七章? 法医DNA理论与技术 第一节法医DNA研究概况 一、发展大事记 　　1980 - Ray White 首次描述限制片段长度多态性标记(RFLP) 　　1985 - Alec Jeffreys发现可变数目串联重复(VNTR) 　　1985 - 聚合酶链反应(PCR)第一篇论文发表 　　1988 - FBI 开始利用DNA分析协助办案 　　1991 - 短串联重复序列 (STR) 第一篇论文发表 　　1995 - 英国开始建立 DNA 数据库 　　1998 - 美国启动 CODIS（DNA检索系统） 数据库 　　2001－人类基因组计划 HGP 完成 人类生命的里程碑? 同时 ?????? 发现300万SNP／1000个碱基对 二、概念(一) DNA多态性? DNA多态性的本质就是由于进化过程中各种原因引起染色体DNA中核苷酸排列顺序发生了改变，即产生的DNA片段和DNA序列在个体内的差异。遗传多态性（Genetic polymorphisms）是指在一个生物群体中，同时和经常存在两种或者两种以上不连续的变异型或者基因型，每种类型的比例都较高，不能由重复突变来维持，一般认为，DNA序列中某些特定位点的变异频率低于1％是为突变，超过1％则为多态，这些DNA序列的不同区域中的大部分也就被称为DNA多态性位点。DNA多态性主要有片段长度多态性和序列多态性两大类，前者指等位基因间片段长度差异，后者指等位基因间的碱基序列差异。DNA的多态性可以通过遗传标记来检测。 （二）遗传标记? 个体的单位遗传性状作为标志用于法医物证分析时，这种遗传性状就称为遗传标记。法医物证学用遗传标记进行个人识别和亲权鉴定。个体的DNA遗传标记是由亲代遗传的DNA信息所决定的，在个体保持终生不变。它具有遗传的稳定性和遗传的多态性。遗传标记可分为表达产物水平遗传标记和DNA水平的遗传标记。前者又分为红细胞血型标记（ABO、MN、Rh），白细胞血型标记（HLA）、血清蛋白型（Hp）、酶型（EsD、PGM1）等。后者，又分为DNA序列多态性和DNA长度多态性。目前，应用的比较多的是DNA水平的遗传标记。 　　遗传标记的多态性程度及其应用价值一般可用杂合度（Heterozygosity, H）、多态信息量（Polymorphism Information Content , PIC）、个体识别力（Discrimination Power ,DP）和非父排除率（Probability of Paternity Exclusion, PPE）来衡量。其中基因杂合度能客观地反映出群体的遗传变异水平，平均杂合度越大，表明群体内遗传差异也越大。PIC直接反映出一个遗传标记所包含或所能提供的遗传信息容量。一般认为，PIC＞0.5时，标记具有高度的可提供信息性；0.5＞PIC＞0.25时，标记能够较合理地提供信息；而当PI＜0.25时，标记可提供的信息性较差。DP和PPE则反映了该遗传标记在法医学个体识别及亲权鉴定中的能力，一般DP＞0.8、PPE＞0.5时，属于高度多态性遗传标记，具有较高的应用价值。 第二节? DNA多态性基本理论与技术 一、基本理论 ㈠ DNA的结构与理化特性　　DNA是由四种核苷酸组成的多聚体。DNA的基本结构单位是核苷酸，由磷酸、脱氧核糖和碱基构成。碱基有四种，分别为腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(C)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)。核苷酸通过磷酸二酯键连接形成多聚核苷酸链。DNA的结构可以分为一级结构、二级结构和三级结构。在自然条件下，DNA分子是以双螺旋方式（二级结构）存在。　　 DNA分子是双螺旋结构，特点是：①DNA是由两条多聚核苷酸链围绕同一中心轴盘绕成右手双螺旋结构；②两条多聚核苷酸链相互平行，方向相反，即一条链为5′端向3′端，另一条链为3′端向5′端，形成反向平行的双螺旋；③DNA多聚核苷酸链的主链是磷酸和脱氧核糖，位于双螺旋的外侧，碱基在内侧。两条多核苷酸链对应的碱基通过氢键连接，形成碱基对(base pair，简称bp)。碱基对的组成有一定的规律，A与T通过两对氢键配对，C与C通过三对氢键配对。一条链上某一碱基是A，则另一条链上与它配对的碱基必定是T。这种A～T、G～C的配对关系称为碱基互补配对原则或碱基互补。由于两条链之间严格的碱基互补关系，当一条核苷酸链的碱基序列确定以后，可推知另一条互补核苷酸链的碱基序列。碱基互补原则是DNA复制、转录和反转录的分子基础，也是所有DNA分析方法最基本的原理。　　 DNA具有变性、复性和分子杂交等理化特性。维持DNA双链结构的主要是氢键。DNA变性(denaturing)是指双链之间的氢键断裂，双螺旋结构解开，形成两条多核苷酸单链的过程。加热、过高或过低的pH、有机溶剂、二甲基亚石风、尿素、甲酰