呼吸道感染常见病原菌ppt课件.ppt

微生物检验 标本采集 根据感染部位不同采集标本，如鼻咽试 子，痰液，脑脊液，脓液等。避免干燥， 及时送检。 检验程序 血液、脑脊液 脑脊液、鼻咽试子、痰、脓液 增菌培养 分离培养 巧克力琼脂 血液琼脂 直接涂片染色 革兰阴性小杆菌多形性 初报 挑选可疑菌落 鉴定 分型 菌落特征 菌体形态 卫星试验 X、V因子需求试验 报告 吲哚 、尿素酶、鸟氨酸脱羧酶（生物分型） 荚膜肿胀试验（荚膜多糖抗原分型） 35℃ 图 流感嗜血杆菌的检验程序 35℃ 5~10%CO2 检验方法 （1）直接镜检：痰液、脓液、鼻咽分泌 物等标本可直接涂片，脑脊液离心取沉 淀物涂片，革兰染色镜检。如查见革兰 阴性短小杆菌，呈多形性，结合临床症 状，作初步诊断。 （2）分离培养： 将血液、脑脊液增菌培养后，转种巧克力琼脂和血琼脂培养基，其他标本可直接划线接种于巧克力琼脂和血琼脂培养基，经35℃培养18～24h，根据菌落特征、菌体形态、溶血情况、卫星试验、X和V因子需求试验定种，再作生化试验和荚膜肿胀试验分型。 卫星试验： 挑取可疑菌落，密集划线接种于兔血琼脂平板和M.H琼脂平板上，再将金黄色葡萄球菌点种于培养基上，35℃，培养18～24h，如见金黄色葡萄球菌周围菌落较大，而远处菌落较小，即卫星试验阳性。 （3）鉴定要点： 本菌为革兰阴性短小杆菌，呈球杆状，逗点状，丝状等多形态性； 在巧克力琼脂平板上为灰白色，中等大小、湿润的菌落； 流感嗜血杆菌血平板卫星试验阳性，M-H琼脂平板卫星试验阴性； 以X、V和X+V因子纸片贴于接种细菌的M-H琼脂平板上，仅在X+V因子周围生长为流感嗜血杆菌。 荚膜肿胀试验： 取一定浓度菌悬液，滴于载玻片上，再依次滴加a～f流感嗜血杆菌抗血清混匀，加少量美蓝液混和后覆盖片，室温10min后，用油镜观察，如查见菌体呈蓝色，周围绕有界限分明未染色的膨大空白圈为阳性。此法可直接检查标本中细菌，作早期诊断 药敏试验： 选用专用培养基 HTM（Haemophilus Test Medium Base） 标准菌株： ATCC 49247 ATCC 10211 结果解释： 流感嗜血杆菌需常规检测β-内酰胺酶， 阳性提示对青霉素、氨苄西林、阿莫西林 耐药。 β-内酰胺酶检测： 头孢硝噻吩（Nitrocefin ） 肺炎链球菌 菌落形态：灰色、圆形、扁平、0.5-1.0㎜的菌落，周围有草绿色溶血环。 菌体形态：革兰阳性球菌，矛尖状、成双排列，宽端相对， 尖端向外。无鞭毛、无芽胞，在机体内或含血清的培养基中可形成荚膜。 Optochin敏感试验：阳性 胆盐溶菌试验：阳性 美国CAP的流行病学调查Community- acquired pneumonia incidence study(CAPIS) 例数 / 10万人 Arch Intern Med 1997;157:1079 美国CAP的流行病学调查Community- acquired pneumonia incidence study(CAPIS) Arch Intern Med 1997;157:1079 肺炎链球菌是不明原因CAP的首要致病菌? 1993年1月-1994年3月西班牙，纳入109例急诊CAP 常规检查手段： 血培养两次 就诊当天及30天后取血查病毒及不典型致病菌抗体 痰涂片及痰培养 肺炎链球菌是不明原因CAP的首要致病菌? 胸腔细针抽吸术： 细菌培养，抗原检测肺炎链球菌、流感嗜血杆菌 PCR检测肺炎链球菌、支原体、衣原体、军团菌、卡氏肺囊虫 肺炎链球菌是不明原因CAP的首要致病菌? 常规检查手段： 54个病人确定病原菌（阳性率50％） 胸腔细针抽吸术： 在54个已知病因者：22个得到证实 另55个未明病因者：36个得以明确，其中18例为肺炎链球菌 1992～2001年青霉素、 红霉素耐药的肺炎链球菌的发展趋势: Alexander 监测 国家 青霉素 I+R 红霉素 r 法国 %R 92 (n=169) 7.7 25.4 %R 01 (n=165) 35.8 * 56.4 * 德国 %R 92 (n=104) 0 1 %R 01 (n=147) 2.4 7.7 意大利 %R 92 (n=70) 24.9 1.4 %R 01 (n=103) 30.2 35.9 * 英国 %R 92