大肠杆菌的培养与分离ppt课件.ppt

苍南中学 许允文 实验1.大肠杆菌的培养与分离 * 苍南中学 许允文 * 微生物 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生生物 原核细胞 真核细胞 非细胞结构 特点：结构简单,形体微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构. 一、基础知识: 1.微生物的种类: * 苍南中学 许允文 * 关于大肠杆菌: 革兰氏染色： 代谢类型： 主要分布： 危害： 应用： 革兰氏阴性菌（不着色） 异养兼性厌氧型 肠道 一般无害，少数有害 是基因工程中的主要受体菌之一 2 核糖体 1 阅读P18-19 * 苍南中学 许允文 * 2.微生物的培养: 1)培养基的营养成分: 2)培养基的种类: 碳源 氮源 水分 无机盐 生长因子 按物理性质分 液体培养基:扩大培养 固体培养基:分离、鉴定、纯化 按功能分 普通培养基： 选择培养基：筛选 鉴别培养基：鉴定 含氨卞青霉素的培养基 伊红——美蓝培养基 * 苍南中学 许允文 * 3.细菌的分离: 原理: 不同的细胞具有不同的菌落特征; 有些微生物对抗生素、高盐等具有抗性的特点。 方法: 划线法、涂布法 选择培养基培养 * 苍南中学 许允文 * 二、大肠杆菌的培养与分离 实验目的: 1、进行大肠杆菌的扩增，利用______培养基进行细菌培养操作。 2、进行大肠杆菌的分离，利用______培养基进行细菌的划线培养。 3、说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。 液体 固体 * 苍南中学 许允文 * 一、配制培养基，调整pH并灭菌，倒平板备用。 按一定营养比例配制培养基+琼脂，融化 调整pH 灭菌 倒平板、搁斜面 细菌:中性偏碱 霉菌:中性偏酸 1、放走冷空气； 2、灭菌锅压力与大气压相同时才能打开。 * 苍南中学 许允文 * 倒平板、搁置斜面 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。 凝固后，倒置放置 思考：如何鉴定灭菌是否彻底？ 放入培养箱中，2d后观察平板是否有菌落生成 * 苍南中学 许允文 * 二、接种、扩大培养 1、扩大培养所用的培养基是？ 2、接种的场所是？ 3、为何要等接种环冷却后，再取菌体？ * 苍南中学 许允文 * 三、划线分离 1、第2、3、4级划线前是否都要对接种环进行灭菌？ 2、下级划线开始于上一级划线的起始端还是末端？ * 苍南中学 许允文 * * 苍南中学 许允文 * 四、培养 将接种后的培养皿放入恒温箱内，在37℃下倒置培养12-24h。 平板稀释涂布法 平板划线法 * 苍南中学 许允文 * 平板划线分离法 用途：一般多用于从菌种的纯化； ?优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离； ?缺点：不能计数 稀释涂布平板法 用途：一般多用于筛选菌株。一般用于平板培养基的回收率计数。 ?优点：可以计数，可以观察菌落特征。 ?缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。如果菌液密度大的话，长不出单菌落。  * 苍南中学 许允文 * 五、纯化与保存 1、如何进一步纯化菌种？ 2、如何保存菌种？ * 苍南中学 许允文 * 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 * 苍南中学 许允文 * 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿壁的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成菌落的细菌随水而扩散，得不到单细胞菌落；防止杂菌污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿壁的培养基上滋生而造成污染，因此最好不要用这个平板培养微生物。 * 苍南中学 许允文 * 5.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染？ 6.在培养后如何判断是否有杂菌污染？ 7.实验完成后，接触过细菌的器皿应如何处理？ 操作快捷,减少操作时间;灭菌要彻底,降低环境污染几率;注意微生物生长条件,如pH、渗透压、温度等。 是否有不同形态的菌落；用显微镜镜检细胞、孢子、芽孢等形态。 高压蒸气灭菌 * 苍南中学 许允文 * 8、转基因用的质粒通常加入了如抗氨苄青霉素基因。转基因质粒转化进入大肠杆菌后，能在含有氨苄青霉素的培养基中生长，而未被转化的就不能生长，其他