实验六改1205.pptVIP

请每位同学课前到讲台前拿 6支试管（注意试管底有破损勿用！！！)  1支1ml吸管、1个橡皮乳头(带黄色内套管) 1张标签纸(请将标签纸贴在其中一支试管上方)每两位同学共用一个不锈钢试管架 医学微生物学与免疫学实验 （六） 肥达反应（widal test）——1【原理】用已知颗粒抗原检测未知抗体及其 相对含量的半定量试验。【意义】辅助诊断伤寒、副伤寒（甲或乙 型）杆菌感染。 结果： 对照管 菌液均匀混浊，管底无凝集块 ＋ 液体较混浊，少量细菌凝集 ＋＋ 液体半澄清，细菌部分沉于管底 ＋＋＋ 液体轻度混浊，细菌大部分凝集 ＋＋＋＋ 液体澄清，细菌全部凝集在管底凝集效价：出现明显凝集（++及其以上加号）的血清 最高稀释度为血清凝集效价。 肥达反应（结果判断）——3 伤寒杆菌O抗体凝集效价在1:80以上；同时伤寒杆菌H抗体凝集效价在1:160以上，或甲、乙型副伤寒菌H抗体凝集效价在1:80以上有诊断意义。 肠道杆菌（enteric bacilli） 是一大群寄居在人 和动物肠道中生物 学形状近似的G－杆 菌。如： 大肠杆菌 肠道致病菌 （伤寒杆菌、痢疾杆 菌、变形杆菌等） 肠道杆菌的鉴定程序 （一）SS平板 （二）双糖培养基 霍乱弧菌 G-；菌体呈弧形或逗点状；一端有单鞭毛， 有些菌株有荚膜。 根据O（耐热）抗原不 同，可将其分为139个 血清群，O1和O139群能 引起霍乱流行。 厌氧芽胞梭菌 是一类在有氧环境下生长不良而在厌氧条件下生长良好的有芽胞细菌。 厌氧菌一般在含有10%H2、10%CO2、80%N2条件下可以生长。常用培养厌氧菌的方法有—— 厌氧罐、箱；气袋法等；也可用庖肉培养基培养。 * * 实验内容 一、肠道杆菌 二、霍乱弧菌 三、厌氧芽胞梭菌 四、操作——肥达反应（先做） 肥达反应——操作 材料：4种菌液（Ag） 伤寒杆菌H菌液 伤寒杆菌O菌液 甲型副伤寒杆菌H菌液 乙型副伤寒杆菌H菌液 1:10倍稀释待检病人血清（Ab） 分组：4人/组，每人做一种菌液 1.盐水 0.5ml 2.血清 0.5ml 弃0.5ml 1 2 3 4 5 6 0.5ml 吹吸3次 3.菌液0.5ml 肥达反应(倍比稀释法） 0.5ml 吹吸3次 0.5ml 吹吸3次 0.5ml 吹吸3次 注意： 1、 1ml吸管每人一支，先吸生理盐水再吸血清，吸过血清的吸管不可再吸生 理盐水。 2、生理盐水、菌液每管均加0.5ml；血清只加1次（0.5ml加入第一管中）。 3、加菌液时由对照管(第6管)开始往前加，每管各加0.5ml；千万不要和管中已 稀释的血清混合。 4、请将稀释血清的吸管和弃去的0.5ml血清去除橡皮乳头后(注意：红色乳胶 头中的黄色橡皮管不要与乳胶头分离) 轻轻放入桶中；橡皮乳头 (连黄色套 管) 放入铜篓内。 5、菌液瓶中的吸管使用后请将吸管归入原瓶中，切勿用错！ 1：20 1：40 1：80 1：160 1：320 对照 血清稀释度 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 对照 血清最终稀释度 1.盐水 0.5ml 2.血清 0.5ml 弃0.5ml 1 2 3 4 5 6 0.5ml 吹吸3次 3.菌液0.5ml 肥达反应(倍比稀释法）——2 0.5ml 吹吸3次 0.5ml 吹吸3次 0.5ml 吹吸3次 H抗体与O抗体