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GB/T 16293-2010 / GB/T 16293-2010 附录B: B.3 培养基平皿培养及保存 制备好的培养基平皿宜在2～8℃保存，一般以一周为宜或按厂商提供的标准执行。采用适宜的方法在平皿上做好培养基的名称、制备日期剂量的标记。 环境测试培养基： 1、TSA（大豆酪蛋白琼脂） 用于细菌取样。 培养温度/时间：30～35℃ 不少于2天。 2、 SDA（大豆酪蛋白琼脂） 用于霉菌和酵母菌取样。 培养温度/时间：20～25℃ 不少于5天。 环境测试培养基： 3、用户认可并验证了的培养基。 以上摘自：GB/T 16293-2010 GB/T 16294-2010 环境监测中常忽视的两个方面： 1、忽视洁净环境中的影响因素 2、忽视培养基的选择 1、忽视洁净环境中的影响因素 （1）API 的残留 （2）消毒剂/杀孢子剂的残留 API 抗菌素 药物活性成分 消毒剂/杀孢子剂 常见的化学消毒剂： 1、酚类 2、醛类 3、过氧化氢类 4、季胺盐类化合物 5、以上混合物 2、忽视培养基的选择 （1）选择性低下，营养全面 （2）含有中和剂 （3）“无菌”平板培养基 培养基的选择 营养琼脂、虎红琼脂 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA） 中和剂的使用： 参见：“中国药典”2010年版 附录109页 附录XI J 表1： “常见干扰物中和剂或灭活方法” 酶（1）：青霉素酶 青霉素酶（ β-内酰胺酶） 可以有效的水解β-内酰胺类抗生素。 包括： - 青霉素G - 氨基青霉素类，如氨苄西林、阿莫西林、匹氨西等 - 羧基青霉素类，如羧苄西林、替卡西林等 - 脲基青霉素类，如呋苄西林、美洛西林等 - 头孢Ⅰ、Ⅱ 酶（2）：头孢菌素酶 头孢菌素酶 可以可有效水解头孢类抗生素Ⅲ及以上的头孢类 抗生素。  包括：头孢羟氨苄、头孢拉定、头孢克洛、头孢呋辛、 头孢克肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松等。 抵抗消毒剂的中和剂： 1、吐温-80 能够消除六氯酚和含汞类消毒剂的影响。 2、卵磷脂 能够消除洗必泰类消毒剂的影响。 3、卵磷脂、吐温-80 能够消除季胺类化合物（苯扎溴铵、苯扎 氯铵等）消毒剂的影响。 理想的环境测试培养基： 无菌平板培养基 （预灌装无菌培养基） 无菌平板培养基优点： 1、A级、B级、C级洁净区直接使用 2、室温储存 3、有效期长 4、无菌包装、包装完整 5、特制平板 6、培养基灌装量大 55mm接触平板（Rodac Plate） Replicate Organism Detection and Counting GMP2010 和 EU GMP: - 平板尺寸：15 X 55 mm - 取样单位面积：25cm2 USP〈1116〉 洁净室和其它控制环境的微生物评估 接触板得取样面积： 24～30cm2 ISO 14698 洁净室及其相关控制环境 取样面积：不小于20cm2 。 取样方法： 采样时培养基表面应与采样点接触不少于10s，向整个接触表面施加恒定均匀的压力（如施加的质量约为25g/cm2），不得有环形或线性运动，装置有接触并拿开后，要加盖并尽快用适当的培养条件培养。 洁净环境微生物检测：方法确认 目前各类官方的指导原则中，很少有对洁净环境微生物监测测试方法提出要求的。 目前各类官方的指导原则中，各种微生物只有生长在如下两种固体表面上的测试方法：琼脂培养基和滤膜，才能够得到确认。 关键区域环境监测培养基： TSA TSA+吐温80+卵磷脂 TSA+酶 结论 环境监控是一种重要的方式，以保证洁净室或无菌生产区域受到适当水平的控制 监测室定性的活动，即使应用于无菌生产这种最关键的活动中，批产品接受与否的结论也不应该仅仅依赖于环境取样的结果 结论 本质上没有人员操作的环境通常在起始阶段即仅有非常低的污染率，并在使用中维持非常低的微生物污染率 然而，人类介入的洁净室情况完全不同。研究显示，即使人员非常小心并正确着装，操作员还是会不断地将微生物带入环境 因此，期望始终看到环境结果为0，即使在关键区域或关键表面上，也是不合理的 结论 洁净室操作人员，尤其是参与无菌生产的人员必须努力维持适当的环境质量，并不断改进人员操作和环境控制 无菌生产机检测中介入人员的减少及去除，将减少微生物污染的风险，从而提高产品安全 目标始终是把污染的发生率降至最