温州无偿献血人群丙肝病毒感染情况及其基因型研究.docVIP

温州无偿献血人群丙肝病毒感染情况及其基因型研究 　　摘要] 目的 了解温州市无偿献血人群丙型肝炎病毒感染及其基因分型的情况。 方法 对2010年1月～2012年12月温州中心血站采集的无偿献血者血液进行丙型病毒性肝炎病毒抗体（抗-HCV）的检测，并对检验结果进行统计分析，同时采用RT巢式-PCR法，对2012年度68例HCV-IgG阳性者进行HCV-RNA的检测及基因分型。结果 温州市无偿献血者丙型肝炎病毒抗体不合格率各年份基本保持稳定，差异无统计学意义（P 　　[关键词] 献血者；丙型肝炎病毒；感染率；聚合酶链反应；基因分型 　　[中图分类号] R512.6；R457.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）02-0151-03 　　Study on the infection of hepatitis C virus and it’s genotypes among voluntary blood donors in Wenzhou 　　LIN Rong1 LIU Yanfei1 CHEN Wenru1 WEN Jinsheng2 WANG Bin1 　　1.Wenzhou City Central Blood Center，Wenzhou 325001，China； 2.Wenzhou Medical University， Wenzhou 325000， China 　　[Abstract] Objective To analyze the infection of HCV and investigate the feature of HCV genotypes among voluntary blood donors in WenZhou. Methods The results of HCV-IgG by ELISA among voluntary blood donors in wenzhou from 2010 to 2012 were statistically analyzed and HCV genotyping was performed using RT- PCR. Results The unqualified rate for anti-HCV was not obviously different year by year（P 　　1.3.2 RT-巢式PCR检测HCV-RNA和基因分型 具体操作参照okamoto法[1]进行。主要步骤为：提取血清总RNA；逆转录合成cDNA，以HCVCore基因区分型PcR引物（引物序列见表1）行套式PCR扩增，两轮PCR 反应体系和反应条件相同。反应体系：10 倍稀释的PCR 缓冲液3 μL，2.5 mmol/L，dNTP 2 μL，dH2O 20.6 μL，上、下游引物各1.5 μL，Taq 酶0.4 μL，模板DNA 1 μL，共计30 μL；反应条件：94℃预变性5 min，94℃变性30 s，55℃退火30 min，72℃延伸30 s，35 个循环，72℃延伸10 min。以聚丙烯酞胺凝胶电泳分析PCR终产物。 　　表1 HCV-RNA基因分型所用引物 　　2 结果 　　2.1 2010～2012年度温州市无偿献血血液检测抗-HCV 不合格率情况 　　2010～2012年度温州市无偿献血者血液抗-HCV检测不合格率见表2，丙肝病毒的感染情况总体趋稳，各年份变化不大，但相比湖南岳阳市2006～2010年[2]、深圳市宝安区2004～2011年[3]报道的平均不合格率低。 　　表2 2010～2012年度温州市无偿献血者血液抗-HCV检测不合格率 　　注：*与2012年比较，**与2010年比较，#与2011年比较 　　2.2 RT-巢式PCR检测HCV-RNA结果（图1） 　　PCR产物长度为144 bp对应基因型为1b，PCR产物长度为174 bp对应基因型为2a，PCR产物长度为144 bp和174 bp则对应基因型1b、2a。 　　图1 HCV基因型分型结果，A为1b阳性（144bp），2a阴性，B为1b阴性，2a阳性（174bp），C为1b阳性（144bp），2a阳性（174bp） 　　2.3 HCV-RNA基因分型结果 　　在所检测的68例标本中基因型1b占30.88%，基因型2a占4.41%，基因型1b和2a占 60.29%，1b总阳性率为91.18%，2a总阳性率为64.71%，未检出1a和2b基因型。 　　3 讨论 　　丙型肝炎病毒是一种常见的肝炎病毒，主要是通过血液传播导致机体感染，是最常见的引起输血后肝炎的病原体[4-5]。因其传播与血液有关，而且国内外的采血站都