钠通道阻滞剂对癫痫大鼠神经元超微结构影响.docVIP

钠通道阻滞剂对癫痫大鼠神经元超微结构影响 　　【摘要】 目的 研究钠通道阻滞剂对癫痫大鼠神经元超微结构的影响。方法 以钠通道阻滞剂拉莫三嗪为干预因素， 通过制作大鼠癫痫模型， 对比正常对照组、正常给药组、癫痫模型组和癫痫治疗组大鼠神经元超微结构改变。结果 癫痫模型组大鼠神经元胞核、胞质改变明显， 癫痫治疗组神经元线粒体肿胀减轻。结论 钠通道阻滞剂对癫痫大鼠神经元超微结构有影响。 　　【关键词】 钠通道阻滞剂；癫痫；拉莫三嗪；超微结构 　　癫痫（Epilepsy）患者的神经元超微结构发生变化， 大量神经元变性、线粒体损伤， 其周围胶质细胞水肿、突触增多， 这些变化影响癫痫的治疗及其预后。新型钠离子通道阻滞剂拉莫三嗪因作用效果好、对神经功能损伤小， 已做为全身强直阵挛的一线药物被临床广泛应用， 此类药物研究多集中在电生理及免疫方面[1， 2]， 对神经系统超微结??影响尚未有人报道。本研究以拉莫三嗪为干预因素， 通过制作大鼠癫痫模型， 对比正常对照组、正常给药组、癫痫模型组和癫痫治疗组大鼠， 研究该药是否对神经元超微结构有影响， 以探讨该药对癫痫转归及预后。 　　1 材料与方法 　　1. 1 材料 　　1. 1. 1 实验动物分组 云南系健康成年雄性SD大鼠40只， 体重（350±20）g （深圳宝安区医院动物实验室提供）， 随机分为4组， 每组各10只：①正常对照组（A组）：未给予任何干预措施。②正常给药组（B组）：正常大鼠予拉莫三嗪灌胃。③癫痫模型组（C组）：以马桑内脂为致癫剂造癫痫模型， 未用拉莫三嗪治疗。④癫痫治疗组（D组）：以马桑内脂为致癫剂造癫痫模型， 用拉莫三嗪灌胃治疗。 　　1. 1. 2 药品试剂、仪器 拉莫三嗪片（商品名 安闲 湖南三金制药有限责任公司）；JEM-1400透射电子显微镜（JEOL）；热膨胀式超薄切片机（Leica）。 　　1. 2 实验方法 　　1. 2. 1 动物模型的制备及取材 每次造模均在上午9∶00～11∶00进行。取大鼠称重后按10 μl/g剂量吸取致癲剂马桑内脂， 微量注射器将马桑内脂注入大鼠脑室内， 观察其活动以Racine做标准：1级：动须、咀嚼；2级：节律性点头；3级：一侧前肢阵挛；4级：站立伴双前肢阵挛；5级：4级+跌倒伴全身抽搐。达到3级或3级以上为制备成功标准。四组在相同条件（清洁、通风、恒温、恒湿）下饲养14 d， 正常给药组、癫痫治疗组每天均在同一时间作灌胃（拉莫三嗪0.15 mg·kg-1·d-1）治疗。 　　1. 2. 2 固定及取材 作灌注固定， 乙醚麻醉大鼠， 固定四肢， 开胸找到心包膜剪开， 穿刺针从心尖部刺入主动脉时用止血钳夹闭， 先输生理盐水并剪开右心耳观察流出液体量和澄清度， 当流出液体变澄清， 肝脏变白时， 继输4%多聚甲醛， 先快后慢， 见大鼠出现肌抖动消失后继续灌注30 min。破颅骨后完整的取出脑组织放入4%多聚甲醛中继续浸泡固定， 浸泡固定时间为6 h温度4℃。 　　1. 2. 3 透射电镜 在进行切片之前先将包埋块修整成所需形状和大小， 制好切片刀和水槽。用Leica热膨胀式超薄切片机切片， 厚度40 nm。将超薄切片放到铜网（已泡二甲苯去脂， 晾干并覆上1% Formar膜）上， 经醋酸铀和枸橼酸铅双染色后电镜观察。 　　2 结果 　　JEM-1400透射电镜在20000倍下观察：①正常对照组神经元线粒体基质均匀， 电子密度一致， 双层膜和板状嵴清晰， 可见较多的高尔基复合体、滑面内质网， 丰富的线粒体、尼氏体及神经原纤维。其周围星形胶质细胞质较少， 胞质的基质较疏松， 着色均匀， 有疏松分布的核糖体和内质网， 线粒体数量多， 体积小。神经毡内有无髓神经纤维， 有髓神经纤维和大量的星形胶质细胞突起。②正常给药组神经元与正常对照组几乎无差别。③癫痫模型组神经元线粒体肿胀明显， 结构模糊， 嵴变形扭曲、断裂消失， 伴线粒体内、外膜的崩解， 且部分线粒体呈空泡变。主要表现为粗面内质网和高尔基复合体扩张， 线粒体肿胀明显， 髓样变性， 尼氏体溶解， 核膜断裂及胞质水肿。星形胶质细胞胞体肿胀而增大， 细胞质电子密度明显低而清亮， 细胞器未见明显改变。神经毡内胶质细胞突起明显， 因肿胀而增粗， 其终末部分变尖， 细胞外间隙缩小， 神经元的胞突及有髓神经纤维和无髓神经纤维改变不明显。④癫痫治疗组神经元线粒体肿胀仍较减轻， 嵴破裂， 部分线粒体基质中出现边界不清的絮状物， 细胞电子密度增高， 星形胶质细胞胞质及突起肿胀较癫痫模型组减轻。 　　3 讨论 　　电压门控钠通道（VGSCs）是内在的神经元和神经肌肉兴奋性的关键因子， 阻滞钠通道减少神经元动作电位产生可用于癫痫治疗， 尤其像SCN1A突变癫痫。而像脑外伤、颅内感染、