细胞质基质与内膜系统ppt课件.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * another 30 min - 1 hr : Plasma Membrane labeled and some radio labeled proteins found in the extracellular space Palade’s original data Proteins were localized to i) rER ii) Golgi iii) Secretory vesicles ER Golgi Secretory Vesicles cell exterior de Duve，G.Palade，分离到了但八只合成和分泌功能的结构。 细胞被破碎，膜碎片形成小囊泡， 小囊泡来自于不同的膜结合细胞器(细胞核、线粒体、质膜、内质网等) 来自于内膜系统的小囊泡称微粒体（microsome) 差速离心分离与功能分析 微粒体(microsomes)分离 微粒体的功能研究 微粒体：保留了膜的结构特征, 活细胞中的生物活性和功能 如：高尔基体的囊泡： 1）将蛋白质和脂进行糖基化修饰的作用 2）分离的特殊蛋白作为抗原制备抗体, 3）制备的抗体与特定的颗粒如金颗粒结合, 4）通过免疫电镜技术就能够对用作抗原的酶进行定位, 5）揭示了高尔基体在复杂的糖装配中的具体过程。 用酵母突变体研究分泌过程及与分泌相关的基因揭示了小泡运输过程。 用突变体研究内膜系统的运输作用 Mutagenize cells and allow to grow at permissive temp. (24 oC). Shift cells to 37 oC (non-permissive temp.) for several hours. Separate cells by density gradient centrifugation Plate the dense cells at 24 oC. Screen individual colonies for defects in secretion *permissive vs nonpermissive temperature sec 突变体的5种不同种类 sec4-2 25 oC sec15-1 after 2 hr @ 37 oC Wild type morphology Accumulation of vesicles 野生型是分泌正常的酵母,A、B、C、D、E是五类不同的sec基因(secretory genes)突变,代表了蛋白质分泌的五个过程。A:分泌蛋白不能进入内质网,B: 内质网出芽缺陷,C:分泌小泡不能与高尔基体融合:D:高尔基体不能形成分泌泡;E:分泌泡不能与质膜融合。 膜结合细胞器与内膜系统 ● 膜结合细胞器(membrane-bound organelles)或膜结合区室(membrane-bound compartments) ● 细胞质膜系统(cytoplasmic membrane system) ● 内膜系统(endomembrane systems) 膜结合细胞器的种类和功能 真核细胞膜结合区室的主要功能 细胞器(区室) 主要功能 胞质溶胶 代谢的主要场所；蛋白质合成部位 细胞核 基因组存在场所，DNA和RNA的合成地 内质网 大多数脂的合成场所，蛋白质合成和集散地 高尔基体 蛋白质和脂的修饰、分选和包装 溶酶体 细胞内的降解作用 内体 内吞物质的分选 线粒体 通过氧化磷酸化合成ATP 叶绿体 进行光合作用 过氧化物酶体 毒性分子的氧化 膜结合细胞器在细胞内的分布 内膜系统的动态性质 主要是由细胞中三种不同的生化活动引起的: ①蛋白质和脂的合成活动: 在动物细胞中主要涉及分泌性蛋白的合成和脂的合成和加工。脂的合成在光面内质网,而分泌蛋白的合成起始于粗面内质网,完成于高尔基体。 ②分泌活动: ③内吞活动(endocytosis pathway),是分泌的相反过程, 细胞将细胞外的物质吞进内体和溶酶体。 内膜系统与蛋白质分选(protein sorting) 蛋白质分选定位的时空概念 时间上 蛋白质的合成分选有两种情况: 先合成,再分选 一边合成一边分选。 为了适于蛋白质分选的时间上的需要,核糖体在合成蛋白质时就有两种存在状态:游离的或与内质网结合的。 空间上