结核诊断FASTPlaque 幻灯片课件.pptVIP

FASTPlaque?  ——结核诊断产品培训 全球结核病疫 世界卫生组织报道： 目前全球有近1/3的人已感染结核杆菌，也就是20亿人口感染了结核菌。 全球有活动性肺结核病人约2000万， 每年新发结核病人约800-1000万， 每年约有300万人死于结核病。 结核病已成为全世界成人因传染病而死亡的主要疾病之一。 我国结核病疫情 结核病感染率高：目前全年龄组结核菌感染率为44.5%，全国约5.5亿人受到了结核菌感染，结核菌感染率高于全球人口感染率为1/3的水平。 结核病患病率高：估算全国现有活动性肺结核病人数450万，其中涂阳肺结核病人150万，菌阳肺结核病人200万。 结核病耐药率高：按照全国菌阳肺结核病人200万计算，全国有耐药病人55.5万。 结核病死亡率高：每年因结核病死亡13万人，为各种其他传染病和寄生虫病死亡总和的2倍。 主要实验诊断方法 WHO新检测法应该有以下的展望： 特异性高 敏感度高 快速 易操作 节约成本 主要特点 快速 痰标本处理后，仅24小时就报告结果 灵敏 检测下限可达100－300 cfu/ml 准确 只检出活的结核分枝杆菌 简单 常规操作，极易掌握 方便 肉眼直接判读结果，无需显微观察 安全 不滋长活体感染源 可检出大量涂片漏诊患者 可用于HIV高危人群的鉴别诊断 噬菌体 －病毒 先以特异性噬菌体感染、裂解标本中的结核分枝杆菌，再用杀病毒剂清除所有未感染MTB的噬菌体，而结核分枝杆菌胞内的噬菌体继续扩增，进而裂解细胞，释放噬菌体。裂解释放的噬菌体感染随即添加的敏感细胞，在其胞内扩增并裂解敏感细胞，敏感细胞菌苔上肉眼可见的噬菌斑。如待检标本不含结核分枝杆菌，噬菌体被杀病毒剂完全清除，故无噬菌体感染敏感细胞，敏感细胞菌苔上无噬菌斑出现。 结果判断标准 质控 阳性对照 ≥20个噬菌斑 阴性对照 ≤10个噬菌斑 适用范围 可检测痰液、胸水、腹水、脑脊液、尿、骨髓等多种标本 用于结核病的实验诊断 抗痨治疗效果的评价 ※尤其是初诊病人的鉴别诊断※ 用于结核菌耐药性的快速检测 用于HIV高危人群的鉴别诊断 一、基本试验条件 超净工作台（最好使用生物安全柜） 旋涡振荡器 冷藏箱（0－4℃） 离心机 可供高压消毒的容器 水浴设备（60℃） 电炉或微波炉 高压蒸汽灭菌设备 恒温培养箱（37℃） 90mm无菌培养皿 移液枪及配套枪头 生物安全罩衣、一次性手套、一次性容器等 FPTB 培养液准备 FPTB 琼脂准备 试剂准备 质控制备 痰液处理方法 (NALC-NaOH) 室温下用NALC-NaOH 处理 痰液15 min 磷酸缓冲液加至45ml中和 4000 rpm 离心 15 min 弃去上清液 用C液15 ml 洗涤 4000 rpm 离心 15 mins 弃去上清液 用 C液 1 ml 重悬 一、技术评价 灵敏性 - 可以检出低浓度的 MTB 标本MTB浓度≥100－300cfu/ml即可检出 特异性 - 只检测活的 MTB 噬菌体法仅对结核分枝杆菌复合群敏感，对其它非结核分枝杆菌、非分枝杆菌均不敏感。 快速 - 48h内出结果 简便 - 不需任何特殊仪器 二、临床评价 结论 1、FASTPlaque法比涂片法和LJ培养法检出率更高； 2、FASTPlaque法与BACTEC-960、 BACTEC-460法检出率无明显差别； 3、FASTPlaque法比LJ培养法和BACTEC-960快速培养法检测周期大大缩短，有助于真正实现结核病的快速诊断，是结核分枝杆菌检测技术的重大飞跃，值得广泛推广。 敏感度数据（国外） 对涂片阴性标本的检出情况 其它类型标本检测结果 检测肺部以外的标本 一些权威的刊物资料提出噬菌体空斑法在肺部以外结核诊断中的时效作用 高特异性 高灵敏度 — 痰标本、淋巴组织切片和抽出物 少数资料用某些类型标本如：脑脊液等 5、其它应用 儿童时期结核 进一步评估的需要 结论 噬菌体空斑法试验在地理上不同区域的应用 用FastPlaqueTB鉴定，阳性标本的检出率约58~84% ，用时两天 在NTMs存在的情况下 结果可以作为优异预期值的指示 检测痰涂片阴性病例 联合痰涂片检测率可达80~90%，用时两天 节约成本 艾滋病患者和肺部以外标本中有理想的结果 Thank you ! 2、用于抗痨效果观察 由于检测结果噬菌斑数量与标本中所含MTB数量成正性相关，因此可通过噬