小鼠脾细胞原代培养及通过差别染色鉴定死活细胞.docVIP

细胞生物学实验报告 题目：小鼠脾细胞原代培养及通过差别染色鉴定死活细胞 姓名: 组员: 导师: 学号: 时间： 文摘： 细胞原代培养 原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织和器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分解成单个游离细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。 细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。二是严格控制无菌条件。 细胞死活鉴定 死活细胞的鉴定方法有很多种，常用的有染色法和仪器分析法。染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作???不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理，但无论采用何种办法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。 染色法分化学染色法和荧光染色法，根据染色机理的不同，染料或使死细胞着色，或使活细胞着色。死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括： 死活细胞，细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。台盼蓝，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。甲基蓝有类似的染色机理。植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。 死活细胞在代谢上的差异：是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。 除此之外，???有一些细胞器的专有染料。如液泡系的专有染料中性红。中性红是一种低毒性染料，可以使活细胞液泡着红色，而细胞质和细胞核不被着色；死细胞的液泡不被着色或浅染，染料弥散于整个细胞中，细胞核和细胞质被染成红色。有时侯为了增加染色效果可以将两种染料结合使用，如甲基蓝-中性红混合染色法。 背景介绍： 高等生物是有多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞 或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的。但如果把活细胞拿到体外培养繁殖并进行观察及研究，则要方便和简单得多。被培养的动物细胞是非常好的实验研究对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类解开生老病死的规律，探索优生抗衰老和防治各种疾病的途径和机制，也可以为人为的诱导和改变细胞的遗传性状和特性，使其向有利于人类健康长寿的方向发展。因此动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学,生物技术，基因工程等研究领域。 有关小鼠脾细胞的培养研究如下： 《灵芝多糖对小鼠脾细胞白细胞介素1、肿瘤坏死因子的产生及其mRNA表达的影响》 ：小鼠脾细胞体外培养3h即可检测到IL－1αmRNA的表达，4h达到高峰，5h后降至不能检出的水平。TNFαmRNA在4h开始出现，4.5h时达到高峰，5.5h后逐渐消失。在培养开始时分别加入灵芝多糖GLB75、10、20、40μg/ml，4h及4.5h分别检测IL－1α及IL－1αmRNA的表达情况。结果：GLB7能促进IL－1α及IL－1αmRNA的表达，对IL－1αmRNA的表达提高率分别为7．6％、67．3％、105．0％、143．1％；对TNFαmRNA的表达提高率分别为9．9％、33．9％、45．9％、75．8％。8h后GLB7对培养上清中IL－1活性的提高率分别为1．4％、3．0％、6．7％、8．1％；12h后对培养上清中TNFα活性的提高率分别为3．0％、14．1％、28．2％、35．7％。结果说明灵芝多糖GLB7能通过促进小鼠脾细胞原代培养对IL－1α及TNFαmRNA的表达从而促进IL－1及TNFα的合成与分泌。（引用自： HYPERLINK /Main/Search.aspx?w=%e9%9b%b7%e6%9e%97%e7%94%9f 雷林生? HYPERLINK /Main/Search.aspx?w=%e7%8e%8b%e5%ba%86%e5%bd%aa 王庆彪 HYPERLINK /Main/Search.aspx?w=%e7%ad%89 等? HYPERLINK /Main/Search.aspx?o=%e7%ac%ac%e4%b8%80%e5%86%