生物物理学2015年第04讲+单分子物物理学技术.ppt

* * * * * * * * * * * Imaging virus-cell interactions in live cells 病毒入侵宿主细胞的过程 * Stochastic Optical Reconstruction Microscopy STORM (随机光学重建显微技术 ) 激发荧光Wavelength: ~几百nm 生物单分子尺寸，例如细胞，只有~3nm 传统荧光光学显微 * STORM (随机光学重建显微技术 ) Trick (诀窍): 先用一束激光把连接有荧光物质的生物样品荧光物质点亮 然后开启另一束激光，这束激光比如说把其能级调整到某个 不发光态。反复开和关第二束激光，连接有荧光物质的样品 被不断地点亮和熄灭。 也就是说此刻亮的点，下一 刻可能就是暗的。 如此这般，就可以对每个点进行精确定位。 通过对所得的点进行整合，就得到一个全新的图像。 * 传统荧光显微 STORM荧光显微 * Seeing is believing （眼见为实) * Virus-Cell Interactions (流感病毒入侵) * Virus-Cell Interactions (流感病毒入侵) * 做 “名女人” * STORM技术 Nature: 2008 Method of the Year * Molecule motor (分子马达) * 分子马达，是对一大类广泛存在于细胞内部的能够把化学能（ATP）直接转换为机械能的蛋白分子的总称 * 分子马达的种类及其生物学模型 驱动蛋白（kinesin） 线性马达 动力蛋白（dynein） 肌球蛋白（myosin） F1-ATP合酶 旋转马达 细菌的鞭毛马达 DNA或RNA马达 * 马达结构示意图 * 线性推进式分子马达是把化学能直接转化为机械能，从而使得马达分子自身能够沿着一条线性轨道作定向移动。 * 1、驱动蛋白（kinesin） Kinesin发现于1985年，主要存在于真核细胞内，以微管蛋白为轨道，沿微管(microtubule)的负极向正极运动。 驱动蛋白Kinesin Note: 正极,“生长”速度快 * 通过两个头部分别结合和水解ATP，导致颈部发生构象改变，使两个头部交替与微管结合，从而沿微管“行走”，将尾部结合的“货物”（运输泡或细胞器）转运到其它地方。 “行走”(walking) 机制 * 驱动蛋白的行走 * Kinesin的作用 将细胞器和各种细胞内物质沿着微管从细胞核移向细胞膜，完成各种细胞内外传质功能. 参与细胞的有丝分裂，在有丝分裂的过程中，驱动蛋白使中心粒分开，导致纺锤体极性的形成。 * Dynein发现于1963年，因与鞭毛和纤毛的运动有关而得名。它主要存在于真核细胞内以及鞭毛和纤毛中。 动力蛋白（Dynein） 2、动力蛋白（dynein） * 动力蛋白(Dynein)的作用 沿微管负向运动运送物质, 将细胞膜的物质移向细胞核； 驱动蛋白(Kinesin)将细胞核的物质移向细胞膜; 驱动蛋白和动力蛋白并不发生竞争，虽然它们想要将货物向相反的方向运送。 Science 2005, Apr 7 * 3. 肌球蛋白(myosin)家族 　　肌球蛋白(myosin)，对它的研究可以追溯到1864年，它是人们最早研究的分子马达之一，主要存在于肌肉纤维和真核细胞内，它属于马达蛋白，可利用ATP产生机械能。 * Molecular Linear Motor ? Myosin 当每个ATP 被它水解之后它可以拉动 肌动蛋白丝行走一步，大量的肌动球 蛋白的协同作用最终导致了肌肉的 收缩现象。 * Molecular Linear Motor ? Myosin (肌球蛋白) 沿微管运动的Myosin * 最典型的旋转式分子马达是F1-ATP酶。 它由两部分组成，一部分镶嵌在线粒体膜上，另一部分暴露在膜外。 镶嵌在膜上的部分有三个亚基构成质子通过线粒体膜的通道，当质子流经这样的通道时产生力矩，从而推动暴露在膜外的亚基的旋转，成为线粒体重要的运输工具 Molecular Motor II * F1-ATP酶旋转的分子马达 一. 澄清分子马达的动力学机制，解释与此有关的生命现象本质, 研究分子马达的控制机理对于发现在众多疾病状态中基本细胞的出错过程有着重要的意义 (癌症、先天性生理缺陷、耳聋、呼吸系统