[医学]结核分子生物学检测.ppt

打开彩页（内部） 生物梅里埃提供 1）一条龙的服务：从涂片、培养、鉴定、药敏到分型 2）结合传统及快速的优点：传统（细菌表面-标准流程）+ 快速（细菌内DNA-快速流程） 实验检测流程 标准流程--涂片（综合医院） 抗酸杆菌涂片占有不可或缺的位置（大多数医院能做），如果检验员发现有抗酸杆菌（即涂阳），部分医院定论为结核分枝杆菌（可引起结核病）。但严格来说是不完全对。根据一些数据，涂阳=有结核分枝杆菌的关系从98-60%不等。 原因： 1）没有抗酸杆菌，检验员看错 2）手工操作（染色）造成误差（所以建议用PREVI COLOR TB）。标准化的操作提高工作效率和可靠性。 其他非结核分枝杆菌 注：涂阳后,最好用分子生物学的方法做快速鉴定 标准流程--培养（综合医院） 涂片镜检以外，培养是必须(分固体及液体)。液体培养包括两种瓶 1）BacT/ALERT? MB瓶（血液） 2）BacT/ALERT? MP瓶 （痰、脑脊液、胸腹水等 ） 更小的医院 改良罗氏培养基(固体培养) [香港每年7000结核病人, 去年香港卖了20万支罗氏培养基] 小医院 可以购买BacT/ALERT 3D 60（ 60个分枝杆菌培养 ）或购 BacT/ALERT 3D 120 （60个分枝杆菌培养 + 60个其他细菌培养） 大医院 可以购买BacT/ALERT 3D 240, 如果不够的话,继续加箱(每次加240) 快速培养仪 1) 既能进行分枝杆菌培养，又能进行普通菌培养 2) MB瓶（血液）及MP瓶 （痰、脑脊液、胸腹水等 ） 3) 小医院: BacT/ALERT 3D 60（ 60个分枝杆菌培养 ）或 购 BacT/ALERT 3D 120 （60个分枝杆菌培养 + 60个其他细菌培养） 4) 仪器容量增加至1440个 鉴定（综合大医院） 分枝杆菌菌种鉴定 药敏（综合大医院） 打开采页（内部） 生物梅里埃提供 1）一条龙的服务：从涂片、培养、鉴定、药敏到分型 2）结合传统及快速的优点：传统（细菌表面-标准流程）+ 快速（细菌内DNA-快速流程） 快速鉴定 不同方法结核菌检测报告时间 罗氏培养: 2-8 周 HPA-Accuprobe: 1h 报告 用菌落或自动培养系统的菌液 HPA-MTD: 2.5h 报告 直接从标本中检测结核菌 Gen-Probe 检测技术 当直接检测数量极少的微生物 ? 扩增 当检测培养物? 杂交 Gen-Probe 三种创新的技术增加检测的灵敏度和简易性 : 以 rRNA 为目标 敏感度高，特异性好 TMA 扩增技术：转录主导扩增法 HPA：杂交保护检测 样 本 前 处 理 杂 交 T.M.A.---转录介导扩增法 快速鉴定及药敏 GenoType? MTBDRplus结核分枝杆菌耐药快速检测系统 准备DNA (0.5 hr) PCR扩增 (2.5 – 3 hrs) 杂交 (2 hrs) 判断结果 采用线性探针技术（Line-Probe或称DNA-Strip）检测结核分枝杆菌复合群利福平(rpoB)和异烟肼(katG和inhA)耐药基因 利福平：rpoB基因 野生型位点: WT1~WT8 耐药突变位点: 531、526A、526B、516 katG基因： 1个野生型位点 2个耐药突变位点 inhA基因: 2个野生型位点 4个耐药突变位点 杂交仪器 结果判读 GenoType? MTBDRplus的反应区 今天结核病实验室诊断新方法 菌株分型 微生物rep-PCR DNA的指纹图谱 特定指纹图谱的形成 系统组成 工作流程：4 小时内完成 - DNA 抽提: 从分离的培养物中抽提DNA. UltraClean Microbial DNA Isolation Kit (Mo Bio Laboratories) - rep-PCR 扩增：使用DiversiLab DNA Fingerprinting Kits指纹图谱试剂盒 - 检测: 用自动、在Agilent 2100 Bioanalyzer 上进行微流电泳DNA LabChip分离扩增片段 - 数据分析：通过独立的安全的互联网使用DiversiLab Software软件，实时地自动分析和处理数据，并得到相应报告 DiversiLab专门为用户容易获得数据而设计 国际项目 快速耐多药结核中国用户 耐多药结核评估文献-中国用户 华西医院 First MDR-TB demo lab in Tianjin CDC First MDR-TB demo lab in Tianjin CDC 2011-3-1 中国卫生部 中国卫生部疾病预防控制局和梅里埃基金会在京联