2012年秋季期生化理论授课课件3 蛋白质的沉淀反应.pptVIP

1．加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 2．了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 3．了解蛋白质变性与沉淀的关系。 在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。 蛋白质的沉淀反应可分为两类。 （1）可逆的沉淀的反应 （2）不可逆的沉淀的反应 1. 蛋白质溶液；5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清的水溶液（新鲜鸡蛋清∶水=1∶9） 2. pH4.7 醋酸-醋酸钠的缓冲溶液 3. 3%硝酸银溶液 4. 5%三氯乙酸溶液 5. 95%乙醇 6. 饱和硫酸铵溶液 7. 硫酸铵结晶粉末 8. 0.1 mol·L-1盐酸溶液 9. 0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液 10. 0.05 mol·L-1碳酸钠溶液 11. 0.1 mol·L-1醋酸溶液 12. 甲基红溶液 13. 2%氯化钡溶液 蛋白质的盐析：无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。叫分段盐析。 如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。 由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。 加5%卵清蛋白溶液5 ml于试管中，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管中内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此时析出的沉淀为清蛋白。（提示：沉淀的前奏是白色浑浊） 取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，观察沉淀的再溶解。 重金属离子沉淀蛋白质 重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。 取1支试管，加入蛋白质溶液2 ml，再加3%硝酸银溶液1~2滴，振荡试管，有沉淀产生。放置片刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？为什么？ 某些有机酸沉淀蛋白质 酸根离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。 取1支试管，加入蛋白质溶液2 ml，再加1 ml 5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察沉淀的生成。放置片刻，倾出上清液，向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。 有机溶剂沉淀蛋白质 取1支试管，加入2 ml蛋白质溶液，再加入2 ml 95%乙醇。混匀，观察沉淀的生成 说明： 1.交代清楚本次实验的内容，强调逐步完成，细心做好实现象的记录 2.指导试管、酒精灯、恒温水浴锅的正确使用 3.强调注意事项： （1）仪器和试剂比较多，使用时要小心谨慎，看准后再用，以防用错； （2）实验内容多，同组的同学做好妥当安排，相互之间错开进行； （3）每项实验应注意观察并做好原始现象和数据的记录， 以便如实地写出试验报告。 列表记录实验现象并加以分析。 * 一、实验目的： 实验三、蛋白质的沉淀反应 二、实验原理： 实验三、蛋白质的沉淀反应 三、实验试剂： 实验三、蛋白质的沉淀反应 四、实验内容： 实验三、蛋白质的沉淀反应 1．蛋白质的盐析—原理和操作 四、实验内容： 实验三、蛋白质的沉淀反应 2．重金属、有机酸、有机溶剂测定—原理和操作 1 — — 1 1 1 — — 1 — 1 — 1 1 1 1 2 3 pH4.7 缓冲液 95%乙醇 0.1 mol·L-1 盐酸 0.1 mol·L-1 氢氧化钠 5%卵清 蛋白 试剂（ml） 管号 振摇混匀后，观察各管有何变化。放置片刻，向各管内加水8 ml，然后在第2、3号管中各加一滴甲基红，再分别用0.1 mol·L-1醋酸溶液及0.05 mol·L-1碳酸钠溶液中和之。观察各管颜色的变化和沉淀的生成。每管再加0.1 mol·L-1盐酸溶液数滴，观察沉淀的再溶解。解释各管发生的全部现象。 取3支试管，编号。依下表顺序加入试剂 四、实验内容： 3. 乙醇引起的变性与沉淀 实验三、蛋白质的沉淀反应 二、实验内容： 实验三、蛋白质的沉淀反应 4. 尿蛋白定性检验：加热醋酸法（个人检查自己的尿液） 3mL尿液加热沸腾，观察有无沉淀。若有测定加入2%醋酸数滴 使显酸性，观察测定情况，记录。 三、实验报告： 实验三、蛋白质的沉淀反应