实验二蟾蜍坐骨神经干电生理实验课件.pptVIP

蟾蜍坐骨神经干复合动作电位特性 Properties of Compound Action Potentials on Toad Sciatic Nerve Trunk 厉旭云 浙江大学医学院 目的（objective）： 测定蟾蜍坐骨神经干复合动作电位（compound action potential ，CAP） ，探讨蟾蜍坐骨神经干的特性、双相动作电位形成机制及神经损伤、药物对神经兴奋传导的影响。 1.材料和方法 (Materials and methods ) 1.1实验动物（laboratory animal) 蟾蜍（中华蟾蜍指名亚种，Zhuoshan Toad） 婚垫 雄蟾 雄蟾 雌蟾 雄性蟾蜍皮肤光滑，前肢趾上有黑色婚垫，会鸣叫。雌性蟾蜍皮肤粗糙，无婚垫，不会鸣叫。 1.材料和方法 (Materials and methods ) 1.2药品(drug) 任氏液、3 mol/L 氯化钾 任氏液由无机盐和蒸馏水配置而成，每升溶液含 NaCl 6.5 g、KCl 0.14 g、CaCl2 0.12 g,、NaHCO3 0.20 g、NaH2PO4 0.01 g。 任氏液的理化特性与蛙的组织液近似。可用于蛙的组织、器官润湿和营养。 1. 3器材( Experimental apparatus) RM6240 生物信号处理系统(RM6240 multichannel physiological recording and processing system )（成都仪器厂）、神经标本盒（ nerve chamber )。 RM6240C微机生物信号处理系统 RM6240微机生物信号处理系统可以同时采集、放大、显示、记录、分析四路生物信号及一路刺激输出，12导联心电图输入记录，可用于人体和动物实验。全程控设置，具有很强的数据分析及输出功能。 神经干标本盒 S+ S- E R1 - R1+ R2- R2+ S+、S-刺激电极，E接地电极，r1- 、r1+和r2- 、r2+引导电极， 刺激电极 引导电极 引导电极 1.4制备坐骨神经干（ preparation of sciatic nerve trunk ） 蟾蜍毁脑脊髓，去上肢和内脏，下肢剥皮浸于任氏液中。 蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上，剪去尾椎；标本腹面向上，用玻璃分针分离脊柱两侧神经丛，用线在近脊柱处结扎，剪断神经；将神经干从腹面移向背面。标本背面向上固定，从大腿至跟腱分离坐骨神经。坐骨神经标本置任氏液中备用。 1.5 仪器连接和参数 (Apparatus junction and parameter) 神经干标本盒两对引导电极分别接微机生物信号处理系统1、2通道。 刺激器输出接刺激电极。1、2通道时间常数0.02s、滤波频率3 KHz、灵敏度5 mV，采样频率：100 KHz，扫描速度：0.2ms/div。单刺激方式，电压1.0 V，波宽0.1 ms，延迟1 ms，同步触发。 S+ S- E R1- R1+ R2- R2+ 神经干标本盒 RM6240C微机生物信号处理系统 第2通道 第1通道 刺激器输出口 刺激电极 第1对引导电极 第2对引导电极 1.6 记录动作电位 神经干标本置于标本盒的电极上，用1.0 V 电压，波宽0.1ms 的单个方波刺激神经干,引导CAP。?????? Central end Peripheral end 刺激电极 引导电极 引导电极 接地 刺激伪迹(Stimulus artifact) 刺激器 放大器 + － 地 刺激电流 i- i+ R+ R- 地 刺激伪迹是刺激电流通过导电介质扩散至两引导电极而形成的电位差信号。 刺激伪迹 2.1 中枢端引导的双相动作电位（biphasic action potential, BAP) 用1.0 V 电压，波宽0.1ms 方波刺激神经干末梢端，观察动作电位波形。 2. 观察（observations) Central end Peripheral end 刺激电极 引导电极 引导电极 2.2 测定末梢端引导的双相动作电位 用1.0 V电压，波宽0.1ms 的单个方波激刺激神经干中枢端，测定动作电位正、负相振幅和时程。??????? Dp1 Dp2 Ap1 Ap2 Ap1 Ap2 （1ch） Peripheral end Central end 刺激电极 引导电极 引导电极 2.3?兴奋传导速度的测定? 用1.0V电压，波宽0.1ms的单个方波激刺激神经干中枢端，测定第1和第2对引导电极引导CAP起点的时间差Δt ，根据 υ＝ S R1