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组织培养药物敏感性检测技术 Histoculture Drug Response Assay (HDRA) HDRA技术介绍 HDRA技术由Hoffman等人于80年代末期建立, 是一种基于非分散性组织的药物敏感性检测技术,该技术将微小组织培养于一种天然胶原海绵基质上,同时加入抗癌药物对其作用一定的时间,细胞活性终点评价采用MTT还原法,结果较为直观可靠. 应用癌种 胃癌 肠癌 卵巢癌 乳腺癌 肉瘤 肺癌 泌尿系肿瘤 头颈部肿瘤 HDRA技术流程 1.肿瘤组织预处理:去脂肪,纤维以及血污. 2.肿瘤组织处理:清洗,眼科镊子和小剪刀进行剪切,使组 织块大小约为1-2mm. 3.将3块组织块放置于约1cm2的胶原海绵小块上,然后放 置于预加有培养基的24孔板中,培养过夜. 4.加入含药物的培养基,每个浓度2个平行孔. 5.继续培养3天后,加入MTT,孵育4h,然后提取还原的MTT,测 定570nm的OD值. 6.药物处理组和对照组进行比较,计算抑制率,评价药物杀伤. 肿瘤组织的处理 培养中的肿瘤组织(一) HDRA培养肿瘤组织形态结构 MTT还原法测定细胞活力 结果评价 加药处理组(T) 空白对照组(C) 抑制率(I)=T/C 敏感药物:I50% HDRA技术特点 1.肿瘤组织不需要进行机械/酶学分散,保持其结构及形 态,减少操作造成的细胞损失. 2.模拟体内药物对癌组织的作用,评价客观,同时避免了 仅进行癌细胞评价的片面性. 3.该技术采用天然胶原海绵作为培养基质,同时培养的 组织接近液面,促进气液交换,保证癌细胞的生长增殖. 4.具有较高的标本可评价率,据报道为90~100%. HDRA技术历史和现状 1.Hoffman等人于80年代末期建立基于胶原海绵的立体 组织培养技术,后应用于原代瘤组织体外药敏检测,至 今已有10余年的历史. 2.目前该技术主要在日本和美国进行大量的临床应用 研究, 公开发表文献50余篇. 3.2002年Singh等人在头颈部肿瘤中的研究表明,该技术 能够评价患者预后,从而指导肿瘤化学治疗. HDRA临床相关性研究 HDRA临床应用研究 乳腺癌 小细胞肺癌 肠癌 肺癌 胰腺癌 HDRA与胃肠癌生存预后 The survival rate of 10 patients whose tumors were sensitive to either mitomycin C and/or 5-fluorouracil in the assay was significantly (P 0.005) better than that of 22 patients whose tumors were shown to be insensitive to both drugs. Twenty-nine patients with stage III and IV colorectal cancer without remaining measurable tumor lesions after surgery were treated with fluoropyrimidines adjuvantly. The recurrence-free survival rate of 7 patients whose tumors were sensitive to 5-fluorouracil in the assay was significantly (P 0.05) better than that of 22 patients whose tumors were insensitive. Kaplan miere 生存曲线 HDRA检测与头颈癌生存预后 Resistance to 5-fluorouracil was present in 13 cases (32%), to cisplatinum in 13 cases (32%), and to both agents in 11 cases (27%). The 2-year cause-specific survival was significantly greater for patients sensitive to 5-fluorouracil (85% vs 64%; p =.04), cisplatinum (86% vs 64%; p =.05)