基因工程复习总结整理.docVIP

第34讲　基因工程 1.基因工程的基本工具 (1)限制性核酸内切酶(限制酶) ①来源：主要从生物中分离纯化而来。 ②作用：识别并切开特定部位的两个核苷酸之间的。 ③结果：产生或平末端。 如下图所示，EcoRⅠ限制酶识别的碱基序列是，切割位点在之间；SmaⅠ限，切割位点在之间；说明限制酶具有。 (2)DNA连接酶 ①作用：将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子。 ②类型 常用类型 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连 来源 功能 “缝合” “缝合” 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的键 (3)载体 ①常用载体——质粒 ②其他载体：、等。 ③载体的作用：携带外源DNA片段进入受体细胞。 (1)基因工程2种工具酶的化学本质分别是什么？运载体的种类有哪些？ (2)限制酶为何不切割自身DNA? (3)限制性核酸内切酶Mun Ⅰ和限制性核酸内切酶EcoR Ⅰ的识别序列及切割位点分别是和。如图表示四种质粒和目的基因，其中箭头所指部位为限制性核酸内切酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示目的基因载体的质粒是哪一种？并指明理由。 2.基因工程的基本操作程序 (1)目的基因的获取 ①目的基因：主要指的基因，也可以是一些具作用的因子。 ②获取方法 (2)基因表达载体的构建——基因工程的核心 ①目的：使目的基因，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 ②基因表达载体的组成③构建过程 (3)将目的基因导入受体细胞 受体细胞种类不同，导入方法不同 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 受体细胞 转化过程 将目的基因插入到Ti质粒的T－DNA上→导入农杆菌→侵染植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA上→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 (4)目的基因的检测与鉴定 1.下列物质或过程哪一项不影响磷酸二酯键数目变化？请逐项分析说明。 ①RNA聚合酶、逆转录酶、Taq酶　②DNA聚合酶、DNA连接酶、DNA酶　③遗传信息的翻译、PCR中DNA解链 ④cDNA文库的构建、基因突变过程 2.(教材P4“寻根问底”改编)根据你所掌握的知识，你能分析出限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？ 3.(教材P6“旁栏思考题”解答)想一想，具备什么条件才能充当“分子运输车”？ 1.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH Ⅰ酶切后，与用BamH Ⅰ酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题： (1)质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有____(答出两点即可)，而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。 (2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是______________； 并且________和________的细胞也是不能区分的，其原因是_____________。 在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落，还需使用含有________的固体培养基。 (3)基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于___________________________________________________________。 2.如图为农杆菌 (1)图中①过程用到的工具酶的特点是________________ (2)图中②过程用到的工具酶是____________，该过程是基因工程最核心的步骤，即____________。 (3)图中③过程，需使用________溶液处理农杆菌使其成为感受态。 (4)图中④过程的原理是____________。 (5)检测基因工程是否________________________________，这是目的基因能否在真核细胞内稳定遗传的关键；其次，利用____________法检测目的基因是否转录出相应的mRNA；最后，利用____________法检测目的基因是否翻译成蛋白质。 (1)诠释基因组文库与部分基因文库 基因文库类型 基因组文库 部分基