2921.论大豆矮秆突变基因的SR标记.pptVIP

科技大学200 届毕业论文答辩 论大豆矮秆突变基因的SSR标记 （生命科学学院生物技术 ） 指导老师： 研究目的与意义 材料与方法 结果讨论 前景展望 大豆[Glycine max（L.）Mer.]是一种具有重要经济价值的饲料和油料作物。其种子中蛋白与脂肪的含量可达40%和20%。目前，大豆已成为一种国际性作物，在美国、巴西、阿根廷、中国和印度等国家广为种植。 矮秆大豆的特征特性 株型紧凑收敛，适于高度密植 群体光能利用率高，增产潜力大 植株粗矮、节间短，抗倒伏能力强 2 实验材料与方法 目前国内在大豆矮秆突变体上所作的工作不多，主要原因是没有合适的材料，由于矮秆突变性状是一个多基因性状，其中又有主效和微效基因之分，所以，如果没有合适的具有明显株高差异的纯系对比材料，是很难进行开展工作，也不可能做出重大成果的。 而我们所使用的材料为由高杆9103进行EMS诱变处理后获得的9103-127矮秆突变体，其生理生化性状除了高矮不同外，其它性状均相同。 实验材料 实验材料 实验材料 实验流程 高秆9103 EMS诱变 矮杆突变体9103-127 高秆9103 × F1 F1 × F2 × F2 F3 提取DNA 高秆基因池 矮杆基因池 验证差异 计算连锁距离 差异性引物 PCR 高秆亲本DNA 矮杆亲本DNA SSR引物 PCR 高秆9103 矮杆突变体9103-127 提取DNA 3. 结 果 矮秆突变体9103-127基因组DNA的多态性检测 矮秆突变体9103-127的BSA分池PCR检测结果 群体分析 矮秆突变体9103-127基因组DNA的多态性检测 根据大豆数据库中已公布的序列，总共合成了433对SSR引物，引物基本覆盖了大豆的全基因组，平均每个连锁群近22个标记座位。由于时间关系，我承担了筛选其中6条引物的任务。用这6条引物对矮秆突变体9103-127及其亲本9103的基因组DNA进行多态性PCR检测分析，扩增产物在3.0%的琼脂糖凝胶上分离。这六条引物均能扩增出条带，其中satt180和satt452有明显的差异。（图一） 图一：六条SSR引物在亲本9103和矮秆突变体9103-127多态性筛选结 采用3.0%的琼脂糖凝胶分离。H代表亲本9103；D代表矮秆突变体9103-127。差异引物置于条带下方 矮秆突变体9103-127的BSA分池PCR检测结果 用筛选出的可能的差异引物satt180和satt452对9103和矮秆突变体9103-127的BSA分池基因组DNA进行多态性分析。扩增产物在3.0%的琼脂糖凝胶上分离。 结果发现，satt***表现为无差异，而satt452在BSA分池的两基因组DNA之间仍呈现多态性（图二），表明satt452与矮秆突变基因之间可能存在连锁关系。 图二：satt180和satt452的BSA分池的多态性检测结果 采用3.0%的琼脂糖凝胶分离。H代表亲本9103混合的BSA池；D代表矮秆突变体9103-127混合的BSA池。标记引物置于条带下方 群体分析 将在BSA分池上具有多态性差异的引物satt452在矮秆突变体F3群体进行分离分析，结果见（图三，表1）。 从分离比例的结果来分析，satt452这个基因座在矮秆突变体F3代的重组率为6.70%，在F3群体中，矮秆突变体带型的几乎接近亲本9103-127矮秆突变体，说明矮秆突变基因为隐性基因，亲本9103-127为隐性纯合矮秆突变体，表明该矮秆突变是受一个主效基因控制的。 图3：satt452 在矮秆突变体9103-127、F3衍生系群体中的PCR扩增结果 （6.0%聚丙烯酰胺变性凝胶,H：9103高杆亲本，D:9103-127矮秆突变体） 表1：引物satt452在矮秆突变基因群体中的检测结果 引物序列 总株数 1 2 0 r cM satt452 113 7 98 8 6.70% 6.74 SSR Locus Linkage Group (LG) Motif Upper primer sequence (5--3) Lower primer sequence (5--3) satt452 E (ATT)12 GCGGTCGCT GCGTTCAATAT GCGCCCAATT ATCATGGTAGA 表2 .与大豆矮杆突变基因相关的SSR引物satt452 鉴于矮秆突变基因的特殊性，我们可以得出，在433对引物中，应该能发现不少的特异性引物，再根据各个引物的检测结果进行连锁分析，可以构建大豆矮秆突变基因的遗传连锁图并可进行基因定位。