[医学]第三章 口腔疾病分子生物学.ppt

口腔疾病分子生物学 付彪 第一节分子遗传学基础 生命的主要遗传物质-DNA DNA的复制 基因表达 中心法则 基因表达的调节 目的及要求 掌握：生命的主要遗传物质；DNA的复制；基因表达及其调节；中心法则。 对遗传物质的认识 孟德尔 发现遗传规律、分离规律及自由组合规律 费雷德里希.米歇尔 最早分离出DNA 阿佛雷德.赫希与玛莎.蔡斯 确认了DNA得遗传功能 詹姆斯.沃森与佛朗西斯.克里克 确认DNA双螺旋结构 核酸的组成、分布及基本化学结构 1.高分子化合物； 2.单体为核苷酸，其包括：一个磷酸分子、一个糖分子、一个碱基; 3. 根据核苷酸的组成又分为DNA和RNA； 4.DNA与RNA的分布； 5.四种碱基：A、C、G、 T/U DNA的复制 1.复制子：一个单独的DNA复制单位。 2.参与DNA复制中的酶和蛋白因子 (见表3-2) 基因 编码蛋白质或RNA等具有特定功能产物的遗传信息的基本单位，是染色体或基因组的一段DNA序列(对以RNA作为遗传信息载体的RNA病毒而言则是RNA序列)。包括编码序列(外显子)、编码区前后对于基因表达具有调控功能的序列和单个编码序列间的间隔序列(内含子)。 基因的表达 1.DNA的遗传信息是通过蛋白质的合成，再由蛋白质发挥各自特定功能的表达。 2.DNA的碱基顺序决定蛋白质的氨基酸顺序。 3.蛋白质的合成是通过RNA来完成。 中心法则 DNA RNA 蛋白质 DNA复制 子代 结构蛋白、酶等 生物多样化 第二节分子生物学研究的主要方法 分子克隆的材料与方法 分子克隆的主要步骤 特异核酸的检测 目的及要求 熟悉分子生物学的基本实验 掌握与基因有关的基本概念，尤其是重组DNA技术的概念和步骤 分子克隆技术 DNA分子的无性繁殖技术 建立依赖于几种因子的发现与运用 限制性内切酶、DNA连接酶、质粒 噬菌体 特点：仅包含蛋白质和核酸 转导 利用噬菌体颗粒为媒介，将外源DNA转移至受菌体并得到表达的生命过程。 分子克隆的主要步骤 1.基因文库的建立 2.目的基因的筛选 3.目的基因的分析 2.0 0.5 Ladder 1 2 3 4 5 6 1.0 0.75 0.25 MW (Kb) 第二次PCR的灵敏度 变形链球菌S.mutans Ingbritt 的数量 Lane 1: 104 CFU, Lane 2: 103 CFU Ladder 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Ladder 对临床菌株的第二次PCR 扩增产物电泳图谱分析 Lane 1~7: 临床菌株S. sobrinus; Lane 8~14:临床菌株 S.mutans. (Kb) 2.0 1.0 0.25 0.1 0.75 0.5 MW Ladder 1 2 3 4 5 Ladder MW 1.0(Kb) 0.75 0.5 0.25 0.1 Ladder 1 2 3 4 5 Ladder MW 2.0(Kb) 1.0 0.25 0.1 0.75 0.5 A B Lane1.chromosomal DNA from S.mutans Ingbritt; 2.chromosomal DNA from S.sobrinus 6715; 3.s