2012年秋季期 生化理论授课课3 核酸化学.ppt

98％核中（染色体） 真核 线粒体 核外 质粒 叶绿体 DNA 拟核 原核 核外：质粒 病毒：DNA病毒 mRNA (5%) 真核 tRNA (10-15%) rRNA（80%） hnRNA和snRNA RNA mRNA 原核 tRNA rRNA 病毒：RNA病毒 什么是核酸？ 核酸是主要存在于 细胞核 中含 磷丰富呈 酸性的 物质，是 核蛋白 的成分之一， 是由核苷酸聚合而成的高聚物，是具有 遗传功能 的生物大分子。依其所含的 组成成分 的不同分为 DNA 和 RNA 两大类，RNA主要包括mRNA、rRNA和tRNA 三小类。 核酸有何重要生物学功能？ 核酸是具有遗传功能的生物大分子，有 遗传大分子或信息大分子 之称，其中 DNA 是遗传信息的载体，是生物体 主要的 遗传物质； RNA 参与蛋白质的生物合成、RNA转录后的加工修饰、基因表达的调节及催化等。 　　　 核苷酸 核苷--磷酸  (碱基－戊糖－磷酸) 继续磷酸化 DNA双螺旋的进一步扭曲构成三级结构——超螺旋（染色体包装） RNA是单链分子，因此，在RNA分子中，并不遵守碱基种类的数量比例关系，即分子中的嘌呤碱基总数不一定等于嘧啶碱基的总数。 RNA分子中，部分区域也能形成双螺旋结构，不能形成双螺旋的部分，则形成突环。这种结构可以形象地称为“发夹型”结构。 在RNA的双螺旋结构中，碱基的配对情况不象DNA中严格。G 除了可以和C 配对外，也可以和U 配对。G-U 配对形成的氢键较弱。不同类型的RNA, 其二级结构有明显的差异。 tRNA中除了常见的碱基外，还存在一些稀有碱基，这类碱基大部分位于突环部分。 tRNA的三级结构－倒 L型 在三叶草型二级结构的基础上，突环上未配对的碱基由于整个分子的扭曲而配成对，目前已知的tRNA的三级结构均为倒L型 Sanger酶法（Sanger双脱氧终止法）的原理 在模板指导下，聚合酶不断将dNTP加到引物的3’-OH末端，使引物延长，合成出新的互补的DNA链，如果加入双脱氧三磷酸核苷(ddNTP）,由于双脱氧核糖的3’位置上缺少一个羟基，故不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，即形成一种全部具有相同5’-引物端和以ddNMP残基为3’端结尾的一系列长短不一片段的混合物。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳区分长度仅差一个核苷酸的单链DNA，从而读取DNA的核苷酸序列。 双脱氧终止法测序试剂 DNA聚合酶； 单链DNA模板； 带有3-OH末端的单链寡核苷酸引物（通常由20-23个碱基构成，G+C=12，A+T=8到11）； Mg2+； 4种dNTP(dATP,dGTP,dCTP和dTTP)； 4种ddNTP(ddATP,ddGTP,ddCTP和ddTTP) ； Tm=60-68℃，避免形成引物二聚体或形成发卡样结构； 思考与练习 1．DNA和RNA的结构和功能在化学组成、分子结构、细胞内分布和生 理功能上的主要区别是什么？ 2．DNA双螺旋结构有些什么基本特点？这些特点能解释哪些最重要的 生命现象？ 3．比较tRNA、rRNA和mRNA的结构和功能。 4．核酸为什么能吸收紫外光？其吸收值在什么情况下最大？什么情况 下最小？为什么？5．谈谈你所知道的核酸研究进展情况及其对生命科 学发展的影响。 5.解释下列名词： （1）C /1，N9—糖苷键 （2）3/，5/—磷酸二酯键 （3）核酸的变性和复性 （4）增色效应和减色效应 6.写出胸苷、腺苷三磷酸、腺嘌呤尿嘧啶二核苷酸的结构式 3.4 DNA的高级结构 3.4.1 环状DNA的超螺旋结构 3.4 DNA的高级结构 3.4.2 真核生物染色体的结构 多级螺旋模型 DNA → 核小体 → 螺线管 →超螺线管 →染色单体 2nm 11nm 30nm 400nm 2-10μm 双螺旋 一级包装 二级包装 三级包装 四级包装 压缩倍数 7 6