朱凤才人感染猪链球菌病的发现与处置课件.ppt

分析流行病学：病因验证（5） 关联的合理性 猪链球菌病是一种人畜共患病，人感染来源于病畜；猪链球菌病流行无明显季节性，但有夏、秋季多发，潮湿闷热的天气多发的特点 本次人疫情发生地与猪疫情发生地范围一致；人发病时间集中在7月下旬到8月上旬，而猪疫情早于人疫情的发生，晚于人疫情终止。 流行区和非流行区村民在年人均收入、养猪数量即猪密度两方面差异有显著性，流行区年人均收入比非流行区低，而养猪密度却显著高 流行区养猪方式都为室内圈养，即所谓“猪圈靠灶边”，通风及卫生条件差；非流行区猪圈与人居住独立分开，通风好 * 分析流行病学：病因验证（6） 因子与疾病的分布相一致 猪疫情发生于相邻的4 个县(市) ，23 个乡(镇)，25 个村庄 人病例地区分布与猪疫情的地区分布完全一致；猪疫情最严重的地方其人间发病人数最多, 猪疫情较轻的县(市) 人间发病人数也较少 关联的特异性 采集病人的血液、脑脊液以及病死猪的内脏，无菌操作接种于血培养基，在有氧和厌氧条件下分离培养细菌 病、死猪中分离的病原与人体无菌部位如血液或脑脊液中分离的病原一致, 均为猪链球菌2 型 关联的可重复性 每个案病例均具有相同的传染、传播途径和非常相似的疾病结局 病例的感染来源，临床特征和转归与国外文献报道也基本一致 选用人源与猪源的菌株，对家猪进行颈部肌肉注射，出现相同症状并死亡 * 病原研究：分离培养 采集患者血液、脑脊液和病猪的内脏（心、脾、肝、肾、淋巴结等），直接接种于血平板，其中血液和脑脊液同时接种到含5%葡萄糖的营养肉汤增菌液，37℃培养24 小时 该菌在葡萄糖肉汤培养基中呈絮状生长, 底部有沉淀 在血平板上为灰白色、凸起、光滑、细小、半透明菌落，直径约0. 5～1 mm，菌落周围有一层草绿色溶血环，属α溶血 * 病原研究：形态学观察 挑取菌落进行革兰染色并在显微镜下观察细菌形态 刚分离的猪链球菌，其形态为典型的革兰氏阳性链球菌，链长达二十多个；多次传代培养后细菌形态不典型，革兰氏染色结晶紫着色呈球杆菌状，不成链 * 病原研究：生化鉴定 微量生化试验 12 株分离株均水解七叶苷、淀粉和精氨酸 不水解马尿酸盐和明胶 分解乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露糖 不分解阿拉伯糖、鼠李糖、山梨醇和甘露醇 API 20 Strep生化试验 12 株分离株均为猪链球菌2 型，鉴定百分率均大于97% 血清凝集试验 12 株细菌和猪链球菌SS2 参考菌株均与猪链球菌2 型参考血清凝集 与猪链球菌1 型参考血清不凝集 生理盐水对照阴性 * 病原研究：菌体脂肪酸分析 菌株来源 被测链球菌菌株6株， 3株分离自南通海安病、死猪的内脏； 2株分离自病人的血液， 1株分离自病人的脑脊液 用猪链球菌型标准菌SS2（来自德国）和肠球菌（粪链球菌）10556和10557（来自美国ATCC）作对照 菌落经纯化、冷冻干燥，氯仿-已烷（1:4）萃取，提取液在美国MIDI公司SHERLOCK全自动细菌鉴定系统中进行菌体膜脂肪酸气相色谱分析 对各菌株的菌体膜脂肪酸的构成指标进行聚类分析和主成分分析 * 被测菌株与库内标准菌株菌体脂肪酸构成的聚类图 * 病原研究：药敏试验 从病人血液、脑脊液中分离的菌株 对氯霉素、头孢类（头孢三嗪、头孢呋新、头孢拉定、头孢塞甲羧肟），菌必治，万古霉素，氨苄青霉素、复方磺胺嘧啶敏感 对青霉素均中度敏感 对四环素、链霉素不敏感 联合药敏试验：猪源与人源菌株药敏结果类似 大剂量青霉素加菌必治对人源菌抑制效果好 猪源菌对氨苄青霉素和复方磺胺嘧啶敏感 * 病原研究：毒力试验 人源与猪源的菌株均对小白鼠不敏感，对家兔和猪敏感。 选用人源与猪源的菌株，对家猪进行颈部肌肉注射和滴鼻喷雾 滴鼻喷雾家猪不敏感 颈部肌肉注射家猪敏感并导致死亡。病理所见为小肠水肿严重，肠壁变薄，肝、肾肿大，瘀血，肺部出血，并从心腔血中检测到与接种菌株相同的链球菌 * 病因推断不必完全依赖病原研究 菌种鉴定在初期认定为H群链球菌中的血链球菌，后期鉴定为R群链球菌中的猪链球菌Ⅱ型 在不明原因疾病的病因探索中，需要做病原学研究 病因推断并不一定要完全依赖和等待病原学结果 本起疫情的病因推断 首先采用的是分析流行病学方法验证病因假设 随着病原学研究的不断深入，才获得充分的实验室病原支持证据，最终确认猪链球菌2型感染 * 不明原因疾病调查的要点（1） 讲究时效性 疾病暴发、重大疾病流行等突发性公共卫生事件，来势迅猛，事先“未预知”，一旦发现，必须尽快予以应急反应 服务于政府，服务于公众和社会 追求科学性，但必须循序渐进 疫情发生初期，各种局面均较为复杂性，临床医生和流行病学专业人员在病因不明的情况下，往往无有效的治疗方案，并难以采取有效防制措施 在疫情初期，资料往往来源于不同部门，其资料完整性和准确性存在差异 疾