实验染体G带技术.pptVIP

染色体G带技术 一、实验目的 学习和掌握胰蛋白酶法的染色体G带显带技术。 二、实验原理 染色体由DNA、组蛋白、非组蛋白等组成。在DNA链上有A-T丰富区及G-C丰富区,用Giemsa染色时,A-T区较G-C区更易染色。当用Tryposin法处理后,染色体上特定的蛋白质组成部分被抽取,使得染色体结构变得不均匀,加强A-T区与G-C区染色上的反差,形成深浅、明暗不同的带。由此,为染色体识别,染色体遗传病诊断,杂种细胞鉴定,特殊细胞株标记等开创了一系列检测方法。 三、实验步骤 1 . 1 作业: 1. 简要说明G带技术的主要原理。 2. 在染色体G带技术的显带过程中,哪个步骤最关键,分析用Trypsin处理时间不同的结果并附绘图。 * 将片置于37℃的pH 7.0 ICN 0.25％trypsin 液中40～100 sec pH7.0GKN15sec 吸去下端多余液体 pH 6.8 PBS 5％Giemsa 染色10－20min 空气干燥 100搜索细胞 400x尋找中期分裂相及染色体分散好的图象 微流水漂洗 吸去下端水分 绘图或拍摄 下端30sec 下端30sec 上端30sec 下端60sec 上端90sec 下端120sec 总酶解时间60sec 总酶解时间120sec 30sec 60sec 120sec 90sec 总酶解时间60sec 总酶解时间120se