抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合氢键课件.pptVIP

第一节 抗原－抗体反应 抗原与相应抗体在体内或体外相遇可发生特异性结合，呈现的某种反应现象。 抗原抗体反应有以下几个特点: 1.抗原与抗体结合是特异性结合 表位(抗原)——超变区(抗体) 2.抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合 氢键、疏水键、静电引力和范德华力(Van der waal‘s force) 、电子云力的合力。 抗原和抗体可解离,性质不变。 3.抗原抗体反应可分为两个阶段 （1）特异性结合阶段  此阶段需时短,仅需几秒到几分钟,无可见 反应出现 （2）可见反应阶段 需时较长,数分,数小时或数日出现可见现 象,表现为沉淀,凝集,细胞溶解等 4.抗原和抗体结合是否呈现明显可见的反应现 象,与两者的分子比例密切相关 抗原抗体反应的主要影响因素： 1.电解质: 在中性或碱性条件下,抗原抗体均带负电荷,适当浓度的电解质会使它们失去一部分负电荷而互相结合,出现明显的沉淀或凝集现象。 2.温度: 37℃ 3. 酸碱度: pH6-8 抗原抗体反应包括： 沉淀反应 凝集反应 溶解反应 补体结合反应 中和反应 已知抗体 检测未知抗原； 已知抗原 检测未知抗体。 一、沉淀反应(precipitation) 概念：可溶性抗原与相应抗体在电解质存在条件下结合，出现沉淀物的现象。 沉淀反应的试验方法：环状法 絮状法 琼脂中沉淀法 环状法 —— 重层法 灵敏度：0.5ug抗体/ml 原理： 絮状法 —— 混合法 灵敏度：1.5ug抗体/ml 原理： 琼脂中沉淀反应法： 双向免疫扩散(double immunodiffusion) 单向免疫扩散(single radial immunodiffusion) 对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis) 火箭电泳(rocket electrophoresis) 免疫电泳(immunoelectrophoresis) (一)双向免疫扩散(double immunodiffusion) 原理：在琼脂板上按一定距离打孔，抗原和抗体分别加入相邻孔中，使其向孔周围扩散，比例适宜相对应的抗原抗体结合，在抗原抗体孔间出现白色的沉淀线(沉淀物)。 灵敏度：1～20μg抗体/ml 应用： 主要用于检测体液中各种蛋白成分，如甲胎蛋白（AFP）、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）等。 (二)单向免疫扩散(single radial immunodiffusion) 原理：抗体预先与琼脂混匀制成凝胶板，打孔,将可溶性抗原加至孔中，向周围扩散，与抗体在比例适宜处形成白色沉淀环。沉淀环的直径与抗原浓度呈正相关。根据沉淀环直径大小从预先绘制成的标准曲线，查出待测标本中抗原含量。 优点：定量测定抗原，方法简便，易观察结果。 灵敏度：1～20μg／ml。 缺点：需时长，1～2天观察结果。 应用：常用于血清中IgG、IgM、IgA和C3的定量检测。 (三)对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis) 原理：在电场中进行双向免疫扩散。 加抗原孔靠近阴极，加抗体孔靠近阳极。通电(缓冲液pH 8.6)后，抗原向阳极泳动，抗体向阴极泳动，二者在比例适宜处形成白色沉淀线。 特点：出结果快于双向免疫扩散，约需1小时； 灵敏度:10μg／ml。 (四)火箭电泳(rocket electrophoresis,又称电免疫扩散) 原理：在电场中进行单向免疫扩散。 抗原在含抗体的琼脂中泳动，二者于比例