11 急性白血病免疫分型 翟志敏.ppt

* * 急性白血病免疫分型  安徽省立医院中心实验室及血液内科翟志敏 免疫分型是用已知的单克隆抗体去鉴定细胞表面或细胞内的免疫标志，可用于剖析细胞的来源及分化阶段。尤其是与流式细胞仪（Flow cytometry，FCM）技术联合应用以来，使诊断急性白血病的准确率提高到90%以上，对肿瘤细胞的认识也更加精细、全面，从而为临床合理治疗、判断预后提供了重要的科学依据。 一 单克隆抗体和白细胞分化抗原 单克隆抗体是指由单克隆细胞专一制造出的高度纯化的特异性抗体。1975年 Kohler和Milstein创立细胞杂交技术，即以人工实验方法将具有某种特定基因和性状的细胞与异种细胞融合产生一种新型细胞，从而具有两种亲本细胞的基因和特点。例如将经过特异抗原刺激后的免疫B淋巴细胞与具有遗传突变缺陷的浆细胞瘤株融合，新产生的杂交细胞既具有分泌特异免疫球蛋白的功能，又具有永久增殖传代的特点，成为大量生产特异免疫球蛋白的理想细胞。如果在此基础上进一步对杂交瘤细胞进行反复筛选，就可以产生一种独立细胞系，也就是单克隆细胞。 细胞表面有很多标志，通常是指细胞表面的抗原分子，能为相应的抗体所识别，随着单克隆抗体技术的发展，越来越多的表面标志被发现，1982年第一届国际人类白细胞分化抗原协作组以英文分化簇（Cluster of Differentiation）的缩写CD统一命名人类白细胞表面的蛋白质分子抗原，由于它们是用相应的抗体发现的，故又称为分化抗原簇，按最初的定义，CD仅指血细胞膜上的一组抗原决定簇，用它来确定细胞的分化阶段，但随着研究的深入，CD这个名称已被引深于称呼血细胞（包括内皮细胞）上的各种分子，至2000年6月，人类白细胞分化抗原命名委员会已命名247个CD分子。 在CD分子系列中，有些属不同类血细胞共有，有些特异地表达于某一类细胞或其发育中的某个阶段，因此利用单抗和CD系列的抗原抗体反应可以大大提高我们识别细胞的能力和水平。 二 正常造血细胞和白血病细胞的抗原表达 各系列正常造血细胞表达的主要相关抗原：T淋巴细胞系：CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8；B淋巴细胞系：CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、  CD79、FMC-7；粒、单核细胞系：CD11，CD13，CD14，CD15，CD33、  CD64、CD65w、CD117及MPO；巨核细胞系：CD41、CD42、CD61、CD62；红细胞系：CD71、血型糖蛋白（Glycophorin）；其它：造血干祖细胞共同抗原CD34、CD38、CD95及末端  脱氧核糖核苷酸转换酶（TdT），人类主要组织  相容性抗原HLA-DR，白细胞共同抗原CD45等。 急性白血病细胞抗原表达特点： 急性白血病细胞来自基因突变引起的造血干祖细胞的恶性克隆性增生，因此既保持造血细胞的性质，又有其独特的生物学和免疫学特性。至今为止已被国际公认并用于常规诊断的所有单个抗原都可在白血病细胞上表达，但与正常造血细胞比较，尚有以下特点：（1）急性白血病主要表现在骨髓或外周血中原始幼稚细胞显著增多，正常细胞成分受抑制，因此免疫分型表现在带有某种抗原标志的细胞比例异常增多或减少，例如T-ALL时的CD7+细胞远远超过正常人的30%，而CD13+/CD33+细胞的比例降低，并可能同时伴有CD34+、TdT+细胞的异常增多； （2）同一细胞出现异系列抗原混合表达，又称为错位表达，如AML细胞出现CD7、CD10抗原，ALL细胞出现CD33、CD14等；（3）抗原非同步化表达，如CD34与分化成熟较晚期的抗原不应该同步表达，但白血病细胞有时会出现CD34/CD56、CD34/CD20等同时表达的异常现象：（4）抗原丢失，如CD13、CD33是髓系最常见抗原，但少数AML却不表达或仅表达其中一项。由此可见，尽管目前尚未发现抗白血病细胞特异性抗体，但充分利用免疫学技术，并对结果进行不同方面的细致分析，几乎可在所有急性白血病中找到抗原异常表达的证据。 三 检测方法 目前检测白血病细胞免疫分型的主要方法是荧光抗体技术，它利用荧光素标记的抗体在一定条件下与细胞内外分化的抗原决定簇结合，荧光素在一定波长激发光照射下，发出一定波长的荧光，借此用荧光显微镜或流式细胞仪就可以检测到与荧光抗体特异结合的标