实验--多聚酶链式反应(PCR).pptVIP

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2018-06-22 发布于上海
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实验--多聚酶链式反应(PCR).ppt

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多聚酶链式反应（PCR）实验仪器 * * * * 了解PCR的基本原理，掌握PCR的基本操作技术一、实验目的多聚酶链式反应是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的体外酶促合成反应。由高温变性，低温退火和适温延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增二、实验原理 1、变性（94℃）：使DNA双螺旋的氢键断裂，双链解离成单链DNA 2、退火（55℃）：引物和其互补的模板在局部形成杂交链 3、延伸（72℃）：通过Taq DNA聚合酶使4种单核苷酸从引物的3`端开始掺入，沿模板从5`向3`端方向延伸，合成与模板DNA的互补链。二、实验原理温度（℃）时间（min） 94 72 60 94℃变性（1min） 60 ℃退火（1min） 72 ℃延伸（1.5min）循环1 循环2 循环3 PCR反应的温度循环周期 PCR 反应的每一个温度循环周期都是由DNA变性、引物退火和反应延伸三个步骤完成的。图中设定的反应参数是94℃变性1min， 60 ℃退火1min， 72 ℃延伸1.5min。如此周而复始，重复进行，直至扩增产物的数量满足实验需求为止。二、实验原理以上3步为一个循环，每一循环的产物可作为下一个循环的模板，反复进行这一循环，可使两端引物限定范围内的DNA序列以指数形式扩增，循环的次数主要取决于模板的浓度，从理论上讲一个目的DNA分子经20次循环扩增后可达106。双链DNA分子双链断开循环1 模板与引物结合循环1 Taq Taq 循环1 Taq Taq 循环1 循环1 双链断开循环2 模板与引物结合循环2 Taq Taq Taq Taq 循环2 94℃变性双链断开循环3 循环3 Taq Taq Taq Taq Taq Taq Taq Taq 循环3 循环n 样品DNA PCR仪，台式离心机，电泳仪，电泳槽 2ml离心管架，移液枪，1. 5ml离心管，0.2ml离心管，枪头 dNTP，Taq酶，引物一对，10×PCR反应缓冲液，灭菌双蒸水，三、实验材料、仪器及试剂电泳仪 * * *