2016高考生物二轮复习 第七单元 专题一 基因工程与细胞工程课件PPT课件.ppt

专题一　基因工程与细胞工程;DNA连接酶;(江苏卷，2T)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：;(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。 (2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是__________________________________________________ __________________。 (4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止________________ ____________________。 ;(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了________。 (7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。;答案　(1)0、2　(2)高　(3)SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因　(4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化　(5)DNA连接　(6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞　(7)蔗糖为唯一含碳营养物质;提分必记的关键点 1.基因工程常考的3种基本工具 限制性核酸内切酶、DNA连接酶和载体。 2.基因表达载体的组成 目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因＋复制原点等。 3.基因工程的四大操作程序 (1)目的基因的获取(三大方法) ①从基因文库中获取。 ②利用PCR技术扩增:其实质是在体外对目的基因进行大量复制。 ③用化学方法人工合成;(2)基因表达载体的构建(此为“核心步骤”)。 (3)将目的基因导入受体细胞的“三大方法”： ①导入植物细胞——农杆菌转化法(花粉管通道法、基因枪法)。 ②导入动物细胞——显微注射法(导入受精卵)。 ③导入微生物细胞——使用Ca2＋处理细胞。 (4)目的基因的检测与鉴定;题组1　基因工程的操作工具与操作步骤;解析　限制酶大多是特异性识别6个核苷酸序列，也有的识别4、5或8个核苷酸组成的序列，A错误；DNA聚合酶只是在延伸阶段发挥催化作用，B错误；质粒上一般带有的抗生素抗性基因可作为标记基因，供鉴定和选择，不是抗生素合成基因，C错误；目的基因导入受体细胞后不一定都能正常表达，D正确。 答案　ABC;2.(2015·江苏卷，32)胰岛素A、B链分别表达法是生产胰岛素的方法之一。图1是该方法所用的基因表达载体，图2表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程(融合蛋白A、B分别表示β－半乳糖苷酶与胰岛素A、B链融合的蛋白)。请回答下列问题： 图1 ;图2 (1)图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是________。 (2)图1中启动子是________酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达；氨苄青霉素抗性基因的作用是___________________________________________________。 (3)构建基因表达载体时必需的工具酶有________。;(4)β－半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于________。 (5)溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链，且β－半乳糖苷酶被切成多个肽段，这是因为_____________________________________ ___________________________________。 (6)根据图2中胰岛素的结构，请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量。你的推测结果是________，理由是______________ _______________________________________。;答案　(1)终止子 (2)RNA聚合　作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来 (3)限制酶和DNA连接酶 (4)防止胰岛素的A、B 链被菌体内蛋白酶降解 (5)β－半乳糖苷酶中含多个甲硫氨酸，而胰岛素A、B 链中不含甲硫氨酸 (6)至少2个　两条肽链的一端各有一个游离的氨基，氨基酸R 基团中可能还含有游离的氨基;2.(2015·福建卷，33)GDNF是一种神经营养因子，对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体(如图1所示)，并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：;