分子生物学技术第七章 DA的重组与转座.pptVIP

第七章 DNA的重组与转座 重组分为4类： 二、同源重组的机制 转座子(元)或转座元件（Tn）：指存在于染色体DNA上可移位的基本单位，它们可以直接从基因组的一个位置移到另一个位置。 转座：指一个转座子由基因组的一个位置转移到另一个位置的过程。 转座子结构特点： a、两端存在末端重复序列，它们在转座过程中很重要 b、内部含有开放阅读框，它能编码一种酶，其功能可促进转座子的转座 c、受体DNA上有很短的靶序列，由于转座子的插入使其形成正向重复序列。靶序列的长短具有特异性 一、转座子类型 1、插入序列(Insertion sequences IS) 指不含任何结构基因的转座子，它是一种自主的单位，仅带有介导自身移动所需要蛋白质的基因,是最简单的转座子。 IS 一般由一段DNA序列（一个转座酶基因，不带其它标记基因）和两端反向重复序列组成，重复序列一般在15-25bp。 不同IS插入位点不同，但序列大多为5-9bp，转位发生后插入位点成为IS两端的同向重复序列。 2、复合式转座子 它是一类较复杂的转座子，由两个重复序列夹着一个或多个结构基因组成。除了含有转位相关的功能外，还带有一些其他基因，如抗药性基因、抗重金属离子基因等。 它们都具有末端反向重复序列、可编码基因和插入位点的正向重复序列 TnA转座子： 结构较复杂，长度约5000bp。两端没有IS结构，仅含有两个末端反向重复序列，一般约38bp。内部通常含有转位相关的基因和抗药性基因等，插入位点约5bp。 Tn3转座子都带有3个基因：一个是编码对氨苄青霉素抗性的β–内酰胺酶基因，其它二个是编码与转座作用有关的基因 二、转座的机制 识别靶序列，内切酶切割形成黏性末端 转座特点： ①能从基因组的一个位点转移到另一个位点； ②转座子编码其自身的转座酶，每次移动时携带转座必需的基因一起在基因组内跳跃，又称跳跃基因； ③转座的频率很低，且插入是随机的，不依赖于转座子和靶位点之间的任何序列的同源性； ④转座子可以插入到一个结构基因或调节基因序列内，引起基因表达内容的改变，严重时可导致细胞死亡。 三、真核生物中的转座子—玉米和果蝇 ①玉米中的转座子（控制因子） Ac-Ds系列： Ac为自主性因子，具有典型的IS特征，两端有11bp的反向重复序列，在其靶DNA位点复制形成8bp的正向重复序列。 Ds为非自主因子，为Ac的缺失突变体，但其两端存在完整的反向重复序列。 ②果蝇中的转座子—P转座子 两端有31bp的反向重复序列,靶位点产生8bp的正向重复序列,有四个外显子和三个内含子，在体细胞中,只有前两个内含子被切除,产生一个转座阻遏蛋白;在卵细胞中,三个内含子全部被切除,可产生转座酶,导致P转座子转座和后代不育。 四、转座的遗传学效应 a、转座引起插入突变 各种IS、Tn转座子都可引起突变 b、转座产生新的基因 转座上存在一些抗药性基因或抗重金属基因等 逆转录转座：真核生物中特有的，需经RNA介导的转座。 * * 同源重组：重组的DNA之间具有同源性 位点特异性重组：重组DNA之间不需要同源，但 是需要识别特异的DNA序列 转座重组：需要转座子 异常重组：不正常细胞加工的结果。 第一节 同源重组 同源重组发生在染色体上具有相同或相近序列的DNA区域 重组的起动需要DNA分子上有断裂或缺口 事实表明，DNA断裂能够大大提高重组率。因此紫外照射、X光和一些能够使DNA断裂的化学物质可大大提高重组率。 一、霍利迪结构(Holliday Structure) 霍利迪结构：它是DNA重组过程中的一个中间体，重组时两个DNA双链体以四股DNA在连结点形成的十字形DNA分子构象。 异源双链 (Hetero duplex)：指在重组部位，每条双链中均有一段DNA链来自另一个双链中的相对链。 分支迁移（Branch migration）：一旦两个重组的DNA分子形成霍利迪结构，交叉连接点很容易像拉链一样移动，从而扩大异源双链体区域，这一过程叫分支迁移。 Holliday st