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赛北紫堇总生物碱LD50测定 　　摘要：选取18～22 g KM小鼠90只，给予不同浓度赛北紫堇[Corydalis impatiens（Pall.）Fisch]生物碱灌胃给药，观察30 min内小鼠的存活情况，利用改良寇氏法公式计算LD50。结果表明，赛北紫堇总生物碱的LD50为176 mg/（kg·bw）。为赛北紫堇的开发和利用提供理论支撑。 　　关键词：赛北紫堇[Corydalis impatiens（Pall.）Fisch]；总生物碱；半数致死量 　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）10-2371-02 　　紫堇属（Corydalis D C.）全球约320种，主要产于亚洲。中国有200余种，全国均有分布，以西南部种类分布最多，其中青藏高原约120余种，仅西藏就多达94种[1，2]。在临床实践中，藏医主要将紫堇属植物用于治疗各种出血、肝炎或胆囊炎、流感等疾病，也有将其用于治疗跌打损伤或其他外伤、发烧、肠胃炎等。赛北紫堇[Corydalis impatiens（Pall.）Fisch]为罂粟科紫堇属植物。在藏药处方中赛北紫堇的入药率高达70%，是藏药应用中很重要的药材。截止目前，尚未见有关急性毒理学试验的报道。本研究旨在通过灌胃给药，利用改良寇氏法进行藏药赛北紫堇总生物碱对小鼠LD50的测定，为临床用药提供参考依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验动物 　　KM小白鼠（青医动字第2012004号），体重18～22 g，雌雄各半，试验前禁食12 h，不禁水。 　　1.2 药品 　　藏药赛北紫堇总生物碱提取物，每克相当于生药22.73 g（藏药赛北紫堇于2011年8月21日采于青海省贵德县，并经由青海省药检所藏药室骆桂法研究员鉴定，总生物碱提取物是由粗粉经2%盐酸渗漉提取，提取液浓缩至小体积后加碱碱化至pH 12，收集沉淀干燥即得，待用时用生理盐水稀释）。 　　1.3 仪器 　　XB-5200B超声波清洗（宁波新芝生物科技股份有限公司）；FA1604电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；金马牌JPT-5架盘天平（上海岑达天平秤有限公司）。 　　1.4 试验方法 　　1.4.1 100%和0%致死量的确定 探索剂量范围：先找出100%致死量与0%致死量为试验的上、下限剂量（Dm和Dn）[3，4]。 　　取KM小白鼠20只，雌雄各半，逐一称重并做好标记，雌、雄分别按照体重由小到大（或由大到小）排序。然后按照分层随机原则将小白鼠分成5组，每组4只，按不同剂量的赛北紫堇总生物碱灌胃给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dm；如降低一剂量出现的死亡率为2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式试验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4倍，作为Dm[5]。同法找出Dn。 　　1.4.2 改良寇氏法测量半数致死量（LD50） 取小白鼠50只，雌雄各半，逐一称重并做好标记，雌、雄分别按照体重由小到大（或由大到小）排序。然后按照分层随机原则将小白鼠分成5个剂量组，每组10只。小白鼠不禁水，禁食12 h后，按照计算剂量将赛北紫堇的总生物碱以灌胃方式给药（按0.2 mL/10g给药）。观察30 min内小白鼠的存活情况，记录各组小白鼠死亡率[6-8]。 　　2 结果与分析 　　2.1 100%和0%致死量 　　由表1、表2可知，赛北紫堇总生物碱的100%和0%致死量分别为316 mg/（kg·bw）和61.2 mg/（kg·bw）。 　　2.2 改良寇氏法测量半数致死量（LD50） 　　按下列公式（1）和公式（2）分别计算公比r和组距i 　　r=■ （1） 　　式中，G为组数；Dm、Dn为上下限剂量。 　　i=（Xm-Xn）/（G-1） （2） 　　式中，Xm、Xn为上下限剂量的对数，G为组数。 　　按下列公式（3）计算LD50[9] 　　LD50=log-1[Xm-i（ΣP-0.5）] （3） 　　式中，Xm为最大剂量的对数；i为组距，即相邻两组剂量之差；P为各组动物死亡率，计算时用小数表示；ΣP为各组动物死亡率总和。 　　按公式（4）、（5）、（6）分别计算log LD50的标准误LD50的95%可信限和LD50的平均可信限： 　　log LD50的标准误=i×■（4） 　　LD50的95%可信限=log-1（log LD50±1.96 S■） 　　（5） 　　LD50的平均可信限=LD50±（LD50 95%可信限的高限-LD50 95%可信限的低限）/2 （6） 　　式中，n为每组动物数（n=10），p、q分别为每组的死亡率和存活率。 　　把表3