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试论瘦肉精检测方法 　　【摘 要】“瘦肉精”是β-肾上腺受体激动剂类化合物的俗称，包括盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇等十几种物质。β-激动剂类化合物大多是医学临床普遍使用的平喘类药物。它们另一个共同特征是，可大大减少食用动物的脂肪、增加瘦肉，缩短动物的生长期。但是如果大量摄入瘦肉精，这些物质很难通过动物的代谢排出体外，而是会聚集于肌肉、内脏等各部位。当通过食物链进入人体，且累计摄入量超过一定值，就会产生毒副作用。在众多β-肾上腺受体激动剂类化合物中，盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CL）和莱克多巴胺（Ractopamine，RAC）因药效显著、价格低廉，成为此类药物在畜禽养殖中应用最为普遍的。虽然世界各国纷纷制定法规严禁盐酸克伦特罗和莱克多巴胺用于畜禽养殖，但因利润驱使，其非法使用的报道还在不断出现。如何高效快速地检测出瘦肉精成分，成为其有效监管的重要环节??? 　　【关键词】瘦肉精；检测方法；进展 　　1.色谱检测法 　　目前，检测瘦肉精残留常用的色谱技术有高效液相色谱（HPLC）、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）、高效液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS） 、毛细管电泳法（CE）等。中国已将高效液相色谱法（HPLC）作为检测饲料中盐酸克伦特罗残留的半确证法，将 GC-MS 法定为确证性方法，主要用于最后确认和仲裁，GB/T22147-2008“饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法”规定了同步测定饲料中β-激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的液相色谱质谱联用法。而对于动物性食品，GB/T 5009.192-2003“动物性食品中克伦特罗残留量的测定”规定的第一法为气相色谱—质谱法，第二法为高效液相色谱法，第三法为酶联免疫法。 　　除了国标方法以外，国内外许多学者也通过研究建立了检测瘦肉精的色谱法。 　　毛细管电泳免疫化学发光检测尿液中盐酸克伦特罗的方法，检测限1.2nmol/L。对于尿液样本的检测结果表明，本方法回收率90%～108%，相对标准偏差小于8%。 　　通过场放大进样同步检测西马特罗、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇的毛细管电泳法。在该系统的最佳条件下，上述物质检测限低于2.0ng/ml，与传统的电迁移进样相比，因更加敏感而更适于尿液中上述指标的测定，在尿液中平均回收率高于95.6%和95.3%，相对标准偏差低于 3.5%。 　　激光诱导荧光毛细管免疫电泳技术（CEIA-LIF）检测盐酸克伦特罗的方法0.7ng/ml。在最优条件下，自由和异硫氰酸荧光素（FITC）标记的盐酸克伦特罗可在8min内分离，迁移时间相对标准偏差为 0.72%，峰面积相对标准偏差为 2.8%。此法具有良好的选择性，高分离效率和灵敏度。与其他免疫方法比较相比，CEIA-LIF的优势在于缩短分析时间，减少试剂消耗，通过消除洗涤步骤简化检测方法。适用于尿液和其他生物液体中CLB的检测。He等（2007）建立了简单，灵敏度高，重现性好的气相色谱-质谱联用的方法检测饲料中的莱克多巴胺和盐酸克伦特罗，检测限分别为4μg/kg和2μg/kg。 　　快速测定饲料及肉类产品中盐酸克伦特罗和沙丁胺醇的微型毛细管电泳法，在最优条件下，二者可以60s内分离，盐酸克伦特罗的检测限为12mol/L，而沙丁胺醇的检测限为0.65nmol/L。盐酸克伦特罗的平均回收率和相对标准偏差分别为84.2%和1.3%，而沙丁胺醇的平均回收率和相对标准偏差分别为81.2%和1.7%。 　　通过将解吸电喷雾电离法与串联质谱法相结合建立快速检测尿液中盐酸克伦特罗的方法，检测限2.0ng/ml，对不同的尿样测定的回收率均在100%±20%，分析一个加标尿样时间在4min以内可以完成。除了分析速度快，串联质谱法还能提供结构信息以对盐酸克伦特罗确认。 　　快速分析克伦特罗，沙丁胺醇，丙卡特罗和非诺特罗的毛细管电泳法，检测时间约1min，检测限0.5～2.0mg/L，线性范围2.0～30mg/L，相关系数0.996。准确性、特异性高无疑是色谱法检测瘦肉精的显著优势，但是由于仪器较为昂贵，其在基层检测部门推广应用还存在一定难度，因此，许多学者开展了基于免疫分析法检测瘦肉精的研究。 　　2.免疫分析法 　　在检测瘦肉精的免疫法中，酶联免疫吸附技术（ELISA）较为成熟，国内外许多公司都开发了基于ELISA 法检测瘦肉精的试剂盒，与 HPLC法相比，更为敏感、快速和经济，但重现性与特异性较HPLC法差，因此适用于大批量样品的快速初筛。 　　检测猪组织中莱克多巴胺时间分辨荧光免疫分析法，当莱克多巴胺浓度为1～10μgkg-1时，加标试验猪肌肉和肝脏中莱克多巴胺的回收率分别为88.2%～110.6%以及102.3%～118.5%。变异系数分