mtDNA多态性研究.pptVIP

动物mtDNA多态性研究的利与弊 自1962年Nass等人首次发现mtDNA，由于其具有的独特优点，mtDNA多态性研究分析已经被广泛应用于动物的物种起源，种间、种内亲缘关系，系统发生、进化、分类以及遗传育种等实践中。 mtDNA多态性研究的优点： 一、动物mtDNA的结构特点： 1.动物mtDNA的结构为双链环状DNA分子。一个线粒体内可有1个或几个DNA分子。 2.分子量较小，大多数动物mtDNA长度为5μm左右，大小约为16.5kb（15.7-19.5kb）处于限制性内切酶的分析范围内。 3.现已确定哺乳动物基因组中有：同启动DNA有关的 D-loop环和13个蛋白质编码区（即细胞色素b、细胞色素氧化酶的3个亚基、ATP酶的2个亚基以及NADH脱氢酶的7个亚基的编码序列）以及分别编码16SrRNA和12SrRNA以及22个tRNA的DNA序列 。 二、母系遗传 动物的mtDNA以母系遗传的方式进行传递，即mtDNA的遗传贡献取决于卵细胞，母系遗传也决定了不论是在不同生态条件下的不同群体间或同一生态条件下的父母本间都不发生重组。 三、无组织特异性 在所有的哺乳动物及绝大多数其他脊椎动物中，个体内mtDNA具有高度的均一性，即对同一个体的肾、心、肝、胎盘、皮肤来讲没有组织特异性。 四、mtDNA进化速度快 mtDNA的进化速度是单拷贝DNA进化速度的5-10倍，多数情况，mtDNA的变异主要是由于碱基替换、转换和颠换原因所致，很少有基因重排；在亲缘关系较近的物种间，mtDNA变异的主要原因是碱基转换，很少发生缺失和插入。 mtDNA进化速度快的原因： 1.mtDNA复制中易发生错配；动物的线粒体缺乏修复机制，γ-聚合酶也不具备核对能力，造成碱基不配对的频率较高。 2.mtDNA代谢时间显著短于核DNA 由于代谢过程中被损伤与破坏的线粒体需要不断补充，这一速度的加快为碱基的突变提供了较多的机会，而且一旦突变发生就将迅速的传递下去。 3.mtDNA受溶变剂的作用 由于mtDNA不为蛋白质压缩，所以线粒体在进行氧化磷酸化和许多代谢反应时，一些自由基和一些代谢中间产物就在其中积累，这些物质都是强的诱化剂，致使mtDNA突变率增高。 4.突变容易固定 这主要是选择压力小的原因，通常情况下，人工选择和自然选择的压力多施加于核DNA上，而线粒体只是细胞进行能量代谢、呼吸的一个细胞器，因而在整个进化过程中承受了相对较小的选择压力，突变所造成的一些变异非常容易固定下来。 mtDNA多态性研究的缺点： 1.mtDNA分子结构多样性问题 虽然线粒体基因组大小和结构在脊椎动物十分保守，在15.7-19.5kb之间，基因排列紧密，为闭合环状分子，但在整个真核生物界中，线粒体基因组大小和结构还是有很大差异的，这种差异可能是由于原始的线粒体基因组在选择压力作用下，有向小基因组和大基因组两个方向进化的可能，因此，不同物种的mtDNA进化途径和速率就会存在差异，这样，用mtDNA对高分类阶元（界、门、纲等）物种进行系统进化研究就会比较复杂，所以，线粒体基因不适合用于深层进化关系的研究。 2.父系mtDNA在子代中是否存在 mtDNA的遗传方式长期被认为是呈严格的母系遗传，而父系mtDNA对后代几乎毫无贡献；有报道称，大鼠精子线粒体在受精时可以进入卵细胞，但他们先是膨胀，然后崩解，在其他动物即使保留至卵裂期，精子线粒体也会通过与溶酶体融合或被泛素化而降解。但是实验证明，精子mtDNA与卵子mtDNA相比，在结构和碱基修饰上并无本质区别。事实上，在精子线粒体解体后，mtDNA的最终去向并不清楚，可能全部水解，也可能掺入卵细胞的线粒体中。Gyllensten等用PCR方法检测到小鼠父系mtDNA与母系mtDNA相比虽仅占10-4，但也会使线粒体基因组产生异质性。 因此，应用mtDNA多态性分析进行系统发育、种群遗传方面的研究，其结果的准确性在一定程度上是值得怀疑的。另外，泛素作为分子伴侣成员之一，它参与了DNA修复、蛋白质及向线粒体运输等活动，因此泛素化是否与父系线粒体的排除直接相关还有待于进一步证实。 还有，在脊椎动物线粒体基因组遗传特性的研究工作中，多以小鼠作为实验模型，但小鼠胞质遗传模式似乎并不能反映所有其他动物的遗传模式，如中心粒在小鼠呈母性遗传，而在人和其他脊椎动物则由精子提供，因此将小鼠mtDNA遗传模式推广到人和其他动物，还有待商榷。 3.线粒体DNA有无重组 线粒体基因组重组由Puhalla等在1967研究链孢霉缓慢生长品系和正常品系异接体时发现的，随后Thomas和Wilkie报道了酵母线粒体基因组有重组发生，但这些结论仅是依据表型