胶质芽孢杆菌Bacillusmucilaginosus.PPT

实验三 细菌的芽孢、荚膜染色法 芽孢和荚膜是某些细菌的特殊结构。 芽孢是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的一个圆形的休眠体，它对不良环境具有很强的抗性。 荚膜是包裹在细胞壁外的一层疏松、胶黏的物质，其成分通常是多糖。 3-1 芽孢染色法 实验目的： 掌握细菌的芽孢染色法。 实验原理：细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色。 除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促使芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比强的染料对菌体进行复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而更能明显地衬托出芽孢，便于观察。 实验材料 菌种：巨大芽孢杆菌 试剂：5%孔雀绿染色液，0.5%沙黄染色液 器具：小试管，烧杯，滴管，洗瓶 仪器：显微镜 其他：载玻片，接种环，擦镜纸，镊子， 香柏油，二甲苯。 实验步骤（改良的Schaeffer和Fulton氏染色法） 制备菌液：加1~2滴自来水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2~3环的菌苔于试管中并充分打匀，制成浓稠的菌液。 加染色液：加5%孔雀绿染色液2~3滴于小试管中，用接种环搅拌使染色液与菌液充分混合。 加热：将此试管浸于沸水浴（烧杯）中，加热15~20分钟。 涂片：用接种环从试管底部挑取数环菌液于洁净的玻片上，并涂成薄膜。 固定：将玻片通过微火3次。 脱色：用水洗，直至流出的水中无孔雀绿颜色为止。 复染：加沙黄染色液，染2~3min后，倾去染色液，不用水洗，直接用吸水纸吸干。 镜检：油镜观察。 记录观察结果： 注意事项 控制菌龄 用改良法是，应先用接种环充分搅拌，然后再挑取菌液，否则菌体沉于管底，涂片时菌体太少。 思考题 在芽孢染色涂片上为什么有时会出现大量游离的芽孢？ 芽孢的染色原理是什么？用一般染色法是否能观察到芽孢？ 3-2 荚膜染色法 目的：掌握细菌的荚膜染色法 原理：由于荚膜与染料的亲和力弱，不易着色，通常采用负染色法，即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色，因而荚膜在菌体周围呈一透明圈，由于荚膜含水量在90%以上，故染色时一般不加热固定，以免荚膜皱缩变形。 实验材料 1 菌种：胶质芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus） 2 试剂：绘图墨水（用滤纸过滤后储藏备用） 3 器皿：载玻片，盖玻片 4 仪器：显微镜 5 其他：擦镜纸，吸水纸，香柏油，二甲苯 方法和步骤：（湿墨水法） 制菌液：现加一滴墨水于洁净的玻片中央，再挑少量菌体与其充分混匀。 加盖玻片：放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，向下轻压，吸收多余的菌液。 镜检：用低倍镜或高倍镜观察 记录结果： 注意事项： 加盖玻片时不可有气泡，否则影响观察 思考题： 组成荚膜的成分是什么？涂片是否可用加热固定，为什么？ 微生物学实验 Lab work on Microbiology 三峡大学化学与生命科学学院微生物学教学组 实验指导老师：涂璇 结 束 请注意实验台面清洁！ 请值日生留下来打扫卫生！