酶细胞原生体的固定化.pptVIP

酶、细胞、原生质体的固定化 制作人：徐彤砚 孟莉 主要内容 酶的固定化 细胞的固定化 原生质体的固定化 固定化酶与固定化细胞的性质与表征 酶的固定化 作为一种生物催化剂，酶具有专一 性强、催化效率高、反应条件温和等优点，在食品工业中发挥着重要的作用。 然而，酶的稳定性差，在强酸、强碱、热及有机溶剂等作用下容易变性，从而使酶活性降低，甚至失活； 其次，酶作用于底物后难以回收利用，在工业上难以实现连续化、自动化，并且造成反应产物分离困难。 固定化酶 固定化酶是指通过各种方法将酶固定在载体上，制备得到在一定的空间范围内呈闭锁状态存在的酶，能连续进行反应，并且反应后的酶可回收后重复利用。 固定化酶的制备一般遵循以下几个基本原则 维持酶的催化活性和专一性； 固定化的载体必须有一定的机械强度，保证其在制备过程中不受破坏； 固定化酶应有最小的空间位阻； 所选载体应具有最大的稳定性，在应用过程中不与废物、产物或反应液发生化学反应。 酶固定化的方法 依据酶的性质及用途不同，可分为吸附法、结合法、交联法、包埋法4种 吸附法 最简单、最经济的方法，可分为物理吸附法和离子交换吸附法，常用的载体有无机载体（如活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔玻璃、磷酸钙、金属氧化物等）、有机载体以及淀粉、白蛋白等天热高分子载体。吸附过程可达到纯化和固定化的目的，而且酶失活后可重新活化再生。 结合法 根据酶与载体结合的化学键不同，可分为离子结合法和共价结合法。 离子结合法是通过离子键结合于具有离子交换基因的水不溶性载体的固定化方法。常用的阴离子交换剂载体：DEAE-纤维素，DEAE-葡聚糖凝胶，Amerlite IRA-193、IRS-410、IRA-900;阳离子交换剂载体有CM-纤维素， Amerlite CG-50、IRC-50、IR-120，Dower-50等。 共价结合法是利用酶蛋白中含有的反应基团与载体上的反应基团形成共价键而使酶固定化的方法。 偶联的基团主要是芳香氨基、羟基、羧基、羧甲基、氨基等非必需功能基团，常用的载体有纤维素、甲壳素、琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶、氨基酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物等。 交联法 利用双功能或多功能试剂使酶分子之间或酶蛋白与其他惰性蛋白之间发生交联、凝聚成网状结构对酶进行固定的方法称为交联法。 常用的双功能或多功能试剂有戊二醛、己二胺、顺丁烯二酸酐、双偶氮苯、异氰酸酯、双重氮联苯胺等。 包埋法 包埋法是将酶包埋在多聚物内的一种方法。分为： 凝胶包埋法：将酶包埋在高分子凝胶细微网格中，常用的载体有明胶、琼脂、琼脂糖、聚丙烯酰胺、光交联树脂、海藻酸钠等； 微胶囊法：将酶包埋在直径只有几微米至几百微米的高分子半透膜中，方法有界面沉淀法、界面聚合法、二级乳化法以及脂质体包埋法。 凝胶包埋法的特点 微囊型包埋法 微囊型包埋法又称半透膜包埋法。 将一定量酶液包在半透性的高分子微孔膜内 。半透膜：直径几十微米到几百微米，厚约25nm。 半透膜孔径酶分子孔径，小于半透膜孔径的小分子底物和产物可以自由进出，被称为“人工细胞”。 与凝胶型包埋法相比，微囊型包埋法的优点： 固定化酶颗粒小，有利于底物和产物扩散。 半透膜能阻止蛋白质分子渗漏和进入，注入体内既可避免引起免疫过敏反应，也可使酶免遭蛋白水解酶的降解，具有较大的医学价值。 缺点：反应条件要求高,制备成本也较高。 包埋法是目前应用最多的一种较理想的方法，与其它固定化方法相比： 优点：不与酶蛋白氨基酸残基反应，很少改变酶的高级结构，酶活回收率高。 缺点：只适合作用于小分子底物和产物的酶。 各种固定化方法的优缺点比较 耦合固定法 单一的吸附固定化酶存在酶和载体容易脱落、结合不牢固等问题。为解决上述问题，研究者不断提出新的载体和固定化方法并在耦合固定化方面进行了大量的研究，所谓耦合固定化是指几种固定化方法或载体的联合使用，即添加稳定因子和促进因子的固定化方法。耦合固定化技术能够平衡和改善传统单一固定化方法的优缺点，使酶在保持原有活性的基础上， 稳定性有所提高， 还具有操作简单，成本低廉等优点。 吸附-包埋 包埋法具有操作方便、条件温和、基本不会改变酶的结构、酶不易脱落等优势、但也存在机械强度差、酶易泄漏、传质阻力较大等问题。利用耦合固定化技术能够很好地解决上述问题。 包埋法使用的一些凝胶分子的间隙较大，容易造成酶在其中的疏漏，通常可以应用以下方法解决:①用交联或共价结合的方法处理包埋酶颗粒；②将酶吸附在一些大分子颗粒上来增大酶分子的体积。将葡萄糖淀粉酶吸附在凝胶化的玉