玉米细菌性枯萎病和玉米内州萎焉病的酶联免疫-实时荧光 PCR检测.docVIP

玉米细菌性枯萎病和玉米内州萎焉病的酶联免疫-实时荧光+PCR检测 浙江农业学报ＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅＺｈｅｊｉａｎｇｅｎｓｉｓ，２０１４，２６（５）：１２７３２６（５）：１２７３－１２７７． ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｚｊｎｙｘｂ．ｃｎ 陈曦，张明哲，林晓佳，等．玉米细菌性枯萎病和玉米内州萎焉病的酶联免疫—实时荧光ＰＣＲ检测［Ｊ］．浙江农业学报， ＤＯＩ：１０畅３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－１５２４畅２０１４畅０５畅２４ 玉米细菌性枯萎病和玉米内州萎焉病的酶联免疫—实时荧光ＰＣＲ检测 陈　曦，张明哲，林晓佳，吴志毅，陈吴健，吴　蓉，夏　拯 １ １ １ １ １ ２ １ （１浙江省检验检疫科学技术研究院，浙江杭州３１００１６；２杭州出入境检验检疫局，浙江杭州３１０００６） 摘　要：针对玉米细菌性枯萎病和玉米内州萎焉病这两种检疫性病菌进行酶联免疫—实时荧光ＰＣＲ检测研究，对该方法进行了特异性、灵敏度以及实际样品模拟试验。结果表明，该方法具有较好的特异性，检测低限在１００～２００ｃｆｕ 关键词：玉米细菌性枯萎病；玉米内州萎焉病；酶联免疫—实时荧光ＰＣＲ中图分类号：Ｓ４３５　　　　　　　　文献标志码：Ａ 文章编号：１００４－１５２４（２０１４）０５－１２７３－０５ －１ ＣＨＥＮＸｉ，ＺＨＡＮＧＭｉｎｇ－ｚｈｅ，ＬＩＮＸｉａｏ－ｊｉａ，ＷＵＺｈｉ－ｙｉ，ＣＨＥＮＷｕ－ｊｉａｎ，ＷＵＲｏｎｇ，ＸＩＡＺｈｅｎｇ １ １ １ １ １ ２ １ Ｔｈｅｉｍｍｕｎｏ－ｃａｐｔｕｒｅｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＰａｎｔｏｅａ．ｓｔｅｗａｒｔｉｉｓｕｂｓｐ．ｓｔｅｗａｒｉｉａｎｄＣｌａｖｉｂａｃｔｅｒｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓｓｕｂｓｐ．ｎｅｂｒａｓｋｅｎｓｅ １２ （ＺｈｅｊｉａｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅ＆ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎ＆Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００１６，Ｃｈｉｎａ；ＨａｎｇｚｈｏｕＥｎｔｒｙ－ＥｘｉｔＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎａｎｄＱｕａｒａｎｔｉｎｅＢｕｒｅａｕ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１０００６，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｎｉｍｍｕｎｏ－ｃａｐｔｕｒｅＰＣＲ（ＩＣ－ＰＣＲ）ｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｗｏｑｕａｒａｎｔｉｎｅｂａｃｔｅｒｉａｌ，Ｐａｎｔｏｅａｓｔｅｗ－ａｒｔｉｉｓｕｂｓｐ．ｓｔｅｗａｒｉｉａｎｄＣｌａｖｉｂａｃｔｅｒｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓｓｕｂｓｐ．ｎｅｂｒａｓｋｅｎｓｅ．Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅ －１ ｅｘａｍｉｎｅｄ，ａｎｄｔｈｅａｃｔｕａｌｓａｍｐｌｅｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｗａｓｈｉｇｈｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｅｎｔｒｙ－ａｎｄ－ｅｘｉｔｓａｍｐｌｅｓ． ｓｐｅｃｉｅｓ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ．Ｔｈｅｍｉｎｉｍｕｍｌｉｍｉｔｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎｉｓｂｅｔｗｅｅｎ１０－１００ｃｆｕ．ｎｅｂｒａｓｋｅｎｓｅ；ｉｍｍｕｎｏ－ｃａｐｔｕｒｅＰＣＲ 目前我国外来生物入侵的情况十分严重 ［１－４］ ３畅２％与８畅８％。与此同时，在进口方面增长速度更加迅猛，２０１１年，全国进口５２５万ｔ，较２０１０年１５７畅２万ｔ，增长了２３３％。因此，加强口岸检疫工作，防范危险性病害传入刻不容缓。 建立有效的病原检测技术体系是防范危险性病菌传入的可靠保证。检疫性玉米细菌病害主要有两种：玉米细菌性枯萎病和玉米内州萎蔫 ，一些具危险性的外来有害生物相继传 ［５－６］ 入，导致新的疫情不断突发在２０００亿元以上 ［７］ 。据报道每年各 种外来有害生物对我国造成的总经济损失估计 。玉米是我国重要的粮谷作 ２ 物，２０１１年在全国的播种面积达３３５４畅２万ｈｍ，总产量为１９２７８畅１万ｔ，较２０１０年分别增长 收稿日期：２０１３－０８－０８ 基金项目：浙江省检疫局课题（ＺＫ２０１３１０；ＺＫ２００９５７）；浙江省自然科学基金项目（Ｙ３０９０２１１）；浙江省重点科技创新团队项目（２０１０Ｒ５００２８）作者简介：陈曦（１９８６—），男，助理农艺师，浙江大学农业推广硕士，主要从事植物检疫工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｘ９２０１＠１６３．ｃｏｍ ［７－１０］ 浙江农业学报　第２６卷　第５期（２０１４年９月） 表１　荧光ＰＣＲ引物序列 Ｔａｂｌｅ１　Ｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｓｆｏｒｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ 引物名称Ｐｓｓ－ＲＰｓｓ－ＦＣｍｎ－Ｒ引物序列 ＡＣＡＡＴＧＧＧＣＧＣＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＧＡＧＧＴＴＡＴＴＡＡＣＣＴ